TCVMA-抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化操作规程.pdf

ICS11.220

．

CCSB41

团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化操作规

程

Operatingproceduresofanti-SIgAmonoclonalantibodypreparationand

purification

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规

则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国兽医协会提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

II

引言

分泌型免疫球蛋白A（secretoryimmunoglobulinA，SIgA）是参与黏膜免疫反应的主要

效应因子，是机体免疫系统中的重要组成部分，在黏膜免疫中发挥着重要作用。

SIgA是由2个单体IgA、J链和分泌片（SC）组成。SC由黏膜上皮细胞和外分泌腺产生，

是SIgA的特有成分，是区分IgA和SIgA的标志。当前，SIgA的检测在动物疫病（如：猪

流行性腹泻、猪气喘病、鸡新城疫、传染性法氏囊、鸭瘟等）的早期诊断和疫苗使用效果评

估上都具有很大的应用价值。但是国内尚缺乏针对SIgA的检测试剂。且采用直接提取的方

式获得的SIgA在纯度上和含量上均难以满足临床需求，本文件针对猪源SIgA的特有成分

SC基因进行原核表达载体的构建，通过pET32a-SC蛋白的表达、纯化及细胞融合技术及免

疫荧光技术等的应用，获得抗猪SIgA单克隆抗体。通过抗猪SIgA抗体浓度的标定，可以

实现对动物血清、粪样或鼻腔粘液等样本中SIgA含量的测定。也可以通过HRP标记、FITC

标记等方式实现待检样品中SIgA定性分析，以满足临床上猪常见的呼吸道、胃肠道类疫病

的诊断及应用。

1

抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化操作规程

1范围

本文件规定了利用Balb/c雌性小鼠（SPF级）进行抗猪SIgA单克隆抗体的制备、纯化

的要求。

本文件适用于抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改单）适用于本文件。

GB14925实验动物环境及设施

GB/T35892实验动物福利伦理审查指南

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

．

B淋巴细胞Blymphocytes

B淋巴细胞简称B细胞，是由造血干细胞发育而来。通过分化，未发育成熟的B细胞

迁移出骨髓进入脾脏、淋巴结等外周淋巴器官，进一步发育为成熟的B细胞，成熟的B细

胞遇到抗原的刺激后，激活、分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体。

3.2

．

饲养细胞feedercells

在体外的细胞培