诊断酶学第五版.ppt

（八）临床酶学测定的标准化1.标准化途径1．使用推荐方法和参考方法2．使用公认的酶校正物或酶参考物2.酶活性浓度测定的参考系统1．建立原级参考方法2．制备原级参考物3．建立参考实验室网络第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日（一）测定原理（二）免疫化学测定的优缺点优点主要有：①灵敏度高②特异性高③能用于一些不表现酶活性的酶蛋白④特别适用于同工酶的测定局限性主要有：①制备足够量的提纯酶作为抗原和具有免疫化学性质的抗血清较困难②测定步骤多，操作繁琐③测定成本高二、酶质量测定第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日三、同工酶检测第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日(一)电泳法---琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳、毛细管电泳●用电泳法进行同工酶分析时，如显示的区带数与同工酶数不一致时，要特别注意巨分子酶的存在。(二)层析法第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日血清LD电泳图谱分析第35页，共55页，星期日，2025年，2月5日正常和病理状况时血清CK同工酶谱第36页，共55页，星期日，2025年，2月5日(三)免疫分析法免疫抑制法利用同工酶的一种亚基与相应的抗体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性；加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性；加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性；所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。第37页，共55页，星期日，2025年，2月5日(四)动力学分析法1．底物特异性分析法2．抑制剂分析法3．pH分析法4．热失活分析法(五)蛋白酶水解法第38页，共55页，星期日，2025年，2月5日第三节常用酶及同工酶测定的临床应用一、血清酶血清酶活性升高的原因：●组织器官受损造成细胞破坏或细胞膜通透性增高，细胞内的某些酶大量释放入血；●细胞的转换率增高或细胞的增殖加快，其特异的标志酶释放入血；●细胞内酶的合成或诱导增强；●酶的清除受阻。第39页，共55页，星期日，2025年，2月5日关于诊断酶学第五版第1页，共55页，星期日，2025年，2月5日第一节概述（一）酶的组成、结构和功能●酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。●酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性(specificity)以及催化作用的可调节性一、酶的概念与特征第2页，共55页，星期日，2025年，2月5日酶的结构和功能●酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具有四级结构。●单体酶(monomericenzyme)---只由一条多肽链构成●寡聚酶(oligomericenzyme)---由多个相同或不同亚基以非共价键连接的酶●多酶体系(multienzymesystem)---由几种不同功能的酶彼此聚合而成的多酶复合物●酶的必需基团(essentialgroup)---与酶的活性密切相关的基团●酶的活性中心(activecenter)---组成具有能与底物结合并起催化反应的特定空间结构区域第3页，共55页，星期日，2025年，2月5日（二）酶的催化作用机制●酶主要通过与底物形成一种或多种中间复合物来降低反应的活化能。●在酶促反应中，酶与底物结合时，底物首先和酶分子上的活性中心相结合，形成酶－底物中间复合物（ES），降低反应的活化能，显著提高了反应速度。第4页，共55页，星期日，2025年，2月5日（三）酶的命名、分类与编号●酶的命名---习惯命名法、系统命名法●酶的分类---可分为六大类氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶(transfera