《综合蛋白表达系统》课件.pptVIP

综合蛋白表达系统欢迎参加《综合蛋白表达系统》课程。本课程将深入探讨蛋白质表达的基本原理、多种表达系统的特点及其在现代生物技术中的广泛应用。蛋白质表达是现代生物技术和生命科学研究的核心技术，它为药物开发、疫苗生产、酶工程以及基础研究提供了重要工具。通过本课程，您将全面了解从原核到真核，从体内到体外的各种蛋白表达系统，掌握表达优化的关键策略，并探索这一领域的前沿发展。

课程概述课程背景与意义蛋白表达系统是现代生物技术的基石，对基础研究和产业应用具有关键作用。掌握各类表达系统的特点和应用，对于生物医药、酶工程等领域的发展至关重要。学习目标系统掌握各类蛋白表达系统的工作原理，能够针对不同蛋白选择最适合的表达策略，并进行表达条件的优化。了解蛋白表达在各领域的应用前景。课程结构课程分为基础概念、表达系统类型、优化策略、应用领域及未来发展五大模块，采用理论与案例相结合的方式，帮助学生全面理解蛋白表达技术。

什么是蛋白表达？基本概念蛋白表达是指将编码特定蛋白质的基因转化为功能性蛋白质的过程。这一过程包括转录（DNA到RNA）和翻译（RNA到蛋白质）两个主要步骤。在生物技术领域，蛋白表达通常指利用各种宿主系统（如细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞）产生重组蛋白质的过程。这些重组蛋白可以是天然存在的蛋白质，也可以是经过改造的人工蛋白质。应用领域蛋白表达在现代生物学研究中扮演着核心角色，被广泛应用于：结构生物学研究功能蛋白质组学抗体和疫苗开发治疗性蛋白生产酶工程与催化剂开发代谢途径工程

蛋白表达系统的类型原核表达系统以大肠杆菌为主要代表，操作简便，成本低，表达效率高，适合简单蛋白的大量表达。大肠杆菌表达系统枯草芽孢杆菌系统乳酸菌表达系统真核表达系统包括酵母、昆虫和哺乳动物细胞系统，能实现蛋白的正确折叠和翻译后修饰。酵母表达系统昆虫细胞-杆状病毒系统哺乳动物细胞表达系统无细胞表达系统不依赖完整细胞，直接利用提取的翻译机器进行蛋白质合成，适合表达毒性或不稳定蛋白。小麦胚芽系统兔网织红细胞裂解液系统大肠杆菌提取物系统

原核表达系统概述优势操作简便，表达周期短高表达量，低成本遗传背景清晰，易于基因操作培养条件简单，易于规模化分子生物学工具丰富局限性缺乏翻译后修饰机制（如糖基化）大分子和复杂蛋白易形成包涵体蛋白折叠有时不正确内毒素污染（尤其在大肠杆菌系统中）膜蛋白表达效率低常用宿主菌株BL21(DE3)：缺乏蛋白酶，提高表达量Rosetta：提供稀有tRNA，优化密码子使用Origami：促进二硫键形成ArcticExpress：低温表达，提高可溶性C41/C43：适合膜蛋白表达

大肠杆菌表达系统系统特点生长速度快，代谢周期约20分钟高密度培养可达100g/L湿重蛋白表达量可达细胞总蛋白的30%以上基因组小，易于遗传操作和修饰营养需求简单，培养成本低常用菌株优势BL21系列：蛋白酶缺陷，减少蛋白降解HMS174：提高质粒稳定性Shuffle：细胞质中促进二硫键形成Lemo21：可调控表达强度SoluBL21：提高蛋白可溶性表达常用载体系统pET系列：T7启动子，表达量高pBAD系列：阿拉伯糖诱导，表达可调控pTrc/pTac：中等强度表达pGEX系列：GST融合表达pMAL系列：MBP融合提高可溶性

pET表达系统系统组成pET系统包含特殊设计的表达载体和宿主菌株。载体含T7启动子、lac操纵子和目的基因。宿主菌株携带λDE3溶原体，编码T7RNA聚合酶。工作原理IPTG诱导lac启动子，产生T7RNA聚合酶。T7聚合酶特异识别T7启动子，转录目的基因。T7聚合酶效率远高于宿主聚合酶，使目的蛋白可达细胞总蛋白的50%。优势特点严格的表达控制，背景表达极低；诱导后高效表达；多种兼容载体可选，提供不同融合标签；与多种优化菌株兼容，适应不同蛋白特性。应用范围适用于实验室研究和工业生产；可表达多种蛋白，包括酶、抗原、抗体片段等；应用于结构生物学、蛋白质组学和功能表征研究。

原核表达优化策略密码子优化不同生物体对密码子的使用存在偏好性，称为密码子偏好。当表达来自不同物种的蛋白时，密码子不匹配可导致翻译效率低下。密码子优化策略：基于宿主tRNA丰度调整密码子使用避免罕见密码子连续使用优化mRNA二级结构，避免发夹结构使用密码子优化软件（如OPTIMIZER,JCat）使用合成基因以获得最佳密码子使用培养条件调整培养条件对蛋白表达量和可溶性有显著影响，需根据蛋白特性进行优化。关键参数优化：温度：降低至15-25℃可提高可溶性诱导时机：通常在对数生长中期诱导剂浓度：IPTG典型浓度0.1-1.0mM培养基成分：复杂培养基vs化学定义培养基添加剂：如甘油、山梨醇等渗透稳定剂培养时间：平衡表达量与包涵体形成

真核表达系统概述酵母表达系统最简单的真核表达系统，生长迅速，成本较