发酵工业的种子制备.pptVIP

种子培养将冷冻干燥管、砂土管中处于休眠状态的工业菌种接入试管斜面活化后，再经摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的过程。这些纯培养物称为种子。01生长活力强，延迟期短；03浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求；05适应性强，生产能力稳定02生理状态稳定；04无杂菌污染，保证纯种发酵；一、种子制备原理与技术优良种子应具备的条件通常检测的培养液中参数pH是否在种子要求的范围之内糖、氨基氮、磷酸盐的含量菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观有无杂菌污染其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾气等122、种子质量的判断方法3、种子制备步骤：斜面培养基中活化；扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培养，完成实验室种子制备一级种子罐，制备生产用种子；视情况确定扩大级数，完成生产车间种子制备；种子转种至发酵罐不产孢子的菌种，保藏基础上，在一定温度下活化即可04菌种产孢子能力不强或孢子发芽慢，可用摇瓶液体培养法03菌种产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖迅速，可用固体培养基培养孢子02无菌方式接保藏的菌种至斜面培养基上，成熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。01(1)、实验室种子制备e.g产黄青霉菌(P.chrysogonum)01原始菌种斜面试管获得孢子250ml茄子瓶（02大米或小米）25~28℃，4~14天成熟（在真空下抽去水03分，使水分含量在10%以下，于4℃冰箱保存）。04e.g.Glutamicacid-producer：（谷氨酸生产菌）01原始菌种（出发菌种）固体试管斜面（32°C，18~24小时）02三角瓶培养（摇床）(flaskculture)03种子罐培养04e.g.yeast：原始菌种（出发菌种）10ml麦汁试管250ml三角瓶培养（27°C~28°C，3天）（25°C，2天）5~10L卡氏罐（15°C~20°C，3~5天）菌种接入种子罐有两种方法孢子进罐法——将斜面孢子制成孢子悬浮液直接接入种子罐，可减少批与批之间的差异，具有操作方便、工艺过程简单、便于控制孢子质量等优点；摇瓶菌丝进罐法——适用于某些生长发育缓慢的放线菌，可以缩短种子在种子罐内的培养时间。实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子罐进行扩大培养01种子罐培养：02获得足够的菌种数量，03种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和培养条件，使菌体适应发酵环境04（2）、生产车间种子制备种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌机会以及减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动010102但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的种子以满足发酵的需求02种子罐级数的确定种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数菌种的性质(如菌种传代后的稳定性)瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度发酵罐中种子培养液的最低接种量种子罐与发酵罐的容积比生产规模随工艺条件的改变作适当的调整确定方法4、种龄与接种量接种龄：种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间种子培养期应取菌种的对数生长期为宜，菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而且会降低产量。01缩短生长过程的延缓期，因而缩短了02发酵周期，提高了设备利用率节约发酵培养的动力消耗有利于减少染菌机会大量地接入培养成熟的菌种的优点：发酵过程中不同的接种龄对多糖产量的影响放射形土壤杆菌多糖（ARPS）接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体的体积的比例01接种量过多，菌丝生长过快、溶氧不足，衰老细胞增加等，发酵后劲不足02种量过少延长发酵周期，形成异常形态，而且易造成染菌。03以生产菌种在发酵罐中的繁殖速度为依据04接种量的大小直接影响发酵周期。05在放射形土壤杆菌多糖（ARPS）发酵过程中不同的接种量对多糖产量的影响原材料质量01培养温度02湿度03通气与搅拌04斜面冷藏时间05培养基06pH07二、影响种子质量的因素 p8101原材料质量波动引起种子质量不稳定02原材料质量波动的主要原因：无机离子含量不同（微量元素Mg2+、Cu2+、Ba2+能刺激孢子的形成，磷含量太多或太少也会影响孢子的质量）。1、原材料质量温度过低，菌种生长发育缓慢温度过高会使菌丝