血型的鉴定方法及操作PPT.ppt

结果判断第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日注意事项（一）：标准血清：健康壮年人混合血清，培养细胞株的单克隆抗体要求：高效价：抗A、抗B≥1：128高亲和性：15s内出现凝集，3min后凝集块1mm2单克隆抗体具有检出A2，A2B的能力冷凝集素效价1：4无菌，病毒灭活第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日注意事项（二）：红细胞试剂：三个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤三次。红细胞悬液不能过浓或过淡，5%生理盐水红细胞悬液第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日注意事项（三）：所有器材清洁干燥一般先加血清，后加红细胞反应温度：IgM抗体反应最适温度为40C，为防止冷凝集素干扰，采用室温，370C反应减弱离心时间和速度：3000g,30s反定型不宜用玻片法结果核对，避免笔误正、反定型结果一致才能报告，否则查找原因第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日正反定型不一致的可能原因（一）：操作技术上的错误：主要原因离心过度或不足细胞与血清反应比例不适当阳性反应产生溶血现象而未能识别漏加试剂、结果判读错误等第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日正反定型不一致的可能原因（二）：出现假阴性的常见原因：某些白血病患者和难治性贫血等导致ABO抗原减弱；免疫系统尚未健全的新生儿、4月~6月内婴儿、抗体水平下降的老人；亚型红细胞抗原性弱，难以检出；低丙种球蛋白血症患者，血清定型时不凝集或弱凝集。第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日正反定型不一致的可能原因（三）出现假阳性的常见原因：红细胞出现多凝集现象；严重肠道革兰氏阴性杆菌感染，可使红细胞获得类B现象；异常的血浆蛋白升高、白蛋白/球蛋白异常，高浓度纤维蛋白原造成假凝集现象；待检血清中有不规则抗体存在；右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞类似凝集。第37页，共59页，星期日，2025年，2月5日方法学评价简单，灵敏度低，只适合IgM抗体试管法：需时短，离心增强凝集，可发现亚型和较弱的反应，正、反定型皆适合玻片法：适合大规模血型普查，反应时间长，有时漏掉弱反应，反定型不适合。第38页，共59页，星期日，2025年，2月5日2.酶介质法（enzymicmediumtest）：原理和方法：主要用于Rh血型鉴定（IgG抗体）蛋白水解酶增强IgG抗体的凝集作用第39页，共59页，星期日，2025年，2月5日注意事项：Rh血型不需作反定型每次实验均需作阳性、阴性对照第40页，共59页，星期日，2025年，2月5日方法学评价简单经济稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血型系统第41页，共59页，星期日，2025年，2月5日3.抗人球蛋白实验（Coomb’stest）原理和方法抗IgG待测红细胞+抗RhD（IgG）+抗人球蛋白红细胞凝集第42页，共59页，星期日，2025年，2月5日关于血型的鉴定方法及操作PPT第1页，共59页，星期日，2025年，2月5日血型的发现1900年，ABO血型系统1940年，Rh血型系统KarlLandsteiner第2页，共59页，星期日，2025年，2月5日血型（bloodtype)狭义地讲，存在于红细胞上的特异性同种抗原。广义地讲，是人类遗传多态性的一种表现，血液中各种成分都有其各自型别。第3页，共59页，星期日，2025年，2月5日红细胞血型（系统，抗原）是存在于红细胞上的化学结构，化学本质是糖和多肽，是红细胞膜上的跨膜蛋白。存在于红细胞膜上（完全抗原），也存在于上皮细胞以及各种体液和分泌液中（半抗原）。RBC存在于体液、分泌液中第4页，共59页，星期日，2025年，2月5日红细胞血型抗体天然抗体、免疫抗体规则抗体、不规则抗体完全抗体，不完全抗体同种抗体，自身抗体第5页，共59页，星期日，2025年，2月5日天然抗体和免疫抗体天然抗体：ABO血型系统中，A型个体血浆中天然存在抗B，B型个体血浆中存在抗A。多数天然抗体是IgM型，最佳反应温度为室温或更低。免疫抗体：一般通过输血、妊娠、注射三种方式接受抗原刺激，多数免疫抗体是IgG型，最佳反应温度是37oC。第6页，共59页，星期日，2025年，2月5日天然抗体和免疫抗体特性比较第7页，共59页，星期日，2025