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实验二
细菌的简单染色与革兰氏染色
一、目的与要求学习微生物涂片、染色的基本技术、掌握细菌的简单染色和革兰氏染色方法。了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。
基本原理简单染色法简单染色法是使用一种染料对细菌进行染色的方法。常采用碱性染料进行染色，因为碱性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷，很容易与带负电荷的细菌细胞结合使细菌着色。碱性染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。细菌产酸使培养基pH下降时，细菌带正电荷增加，可采用酸性染料。酸性染料有：伊红、酸性复红、刚果红等。
2、革兰氏染色革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。G＋菌：细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，基本不含类脂，肽聚糖分子交联度较紧密，故经乙醇处理后，肽聚糖网孔因脱水而明显收缩，使壁的通透性降低保留着结晶紫－碘复合物，所以复染液番红不能进入,细胞显紫色。G-菌：细胞壁薄，肽聚糖含量低，类脂含量高，肽聚糖分子交松散，故经乙醇处理后，壁会出现较大的缝隙，细胞透性增大，结晶紫－碘复合物易被洗脱出来，再经番红复染后使细胞显红色。
三、实验器材菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌染色剂：简单染色液(吕氏碱性美蓝染液)；革兰氏染色液（草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红染液）仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等
四、操作步骤#2022
葡萄球菌
杆菌
五、实验数据及处理结果根据油镜观察结果，绘出普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的简单染色形态图。列表简述普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的革兰氏染色油镜观察结果（菌的形态、颜色、革兰氏染色反应）。
六、思考与讨论如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？下次实验项目：细菌的芽孢染色和鞭毛染色
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