氨基酸分析在重组蛋白类生物制品质量控制中的应用研究 .pdf

聚酸分析蛆蛋白类生物制品质B控制中的应脚究

1氨基酸分析基本原理和方法综述

氨基酸分析用化学或者生物化学方法准确地确定蛋白质或者多肽的氨基酸成分、顺序和含量。氨基酸分析方法

包括高效液相色谱法（HPLC）、毛细管电泳法、氨基酸自动分析仪法和质谱法等。这些方法可以实现样品的定性与定

量分析，从而为深入了解蛋白质结构与功能，提供关键信息［1］。

2重组蛋白类生物制品的意义及其挑战

重组蛋白类生物制品被广泛用于医学治疗、疫苗开发和诊断试剂中，其结构复杂，且容易受到生产过程的影响，

导致产品质量发生变异。因此，保证这类产品的安全非常重要。同时，重组蛋白分子量较大、稳定性较差，且翻译后修

饰种类繁多，给其质量控制带来了严峻的挑战。因此，相关机构有必要建立一种严格而有效的检测手段。氨基酸分析能

够直观地反映蛋白质一级结构特征，评价重组蛋白类生物制品的纯度、完整性，以及折叠和翻译后的修饰状态。基于此，

本研究探索了氨基酸分析技术在重组蛋白类生物制品质量控制方面的运用，以揭示该技术的潜在价值，为重组蛋白类生

物制品质量控制体系的进一步优化，提供理论依据与技术支持。

3氨基酸分析用于重组蛋白类生物制品的质量控制

3.1序列确认

氨基酸组成及序列分析，对于重组蛋白精确性及一致性的检验至关重要。通过将实际测得氨基酸序列同预期设计

理论序列进行比对，能够准确判断蛋白质表达的正确性，评价批次之间的一致性，保证药物有效安全。在重组蛋白类生

物制品质量控制过程中，序列确认保证产品结构正确一致的核心步骤，氨基酸分析技术对这一进程有着至关重要的作

用［2］。

3.2纯度评估

氨基酸含量的比例分析，可以有效反映重组蛋白的纯度高低。通过准确测定目标蛋白各氨基酸的含量，可计算目

标蛋白和其他杂质（如宿主细胞的蛋白、降解产物）之间的配比，定量评价产品质量。

3.3端点氨基酸识别

通过识别N端、C端的氨基酸，可以识别重组蛋白能否完成适当的翻译，以及有无截短、延长等现象。同时，

N/C端氨基酸状态可揭示乙酰化和甲基化等翻译、修饰对蛋白质活性的意义。

3.4疏水性

电荷分布及其他理化性质分析表明，氨基酸组成决定了蛋白质三维结构与功能特性。利用氨基酸分析得到的疏水

性和电荷分布等数据，可以间接推测重组蛋白空间构象及稳定性，这对于优化生产工艺、提高产品质量，具有重要参考

意义。

3.5差异性糖基化或者磷酸化位点的检测

蛋白质翻译、修饰后，会显著影响重组蛋白活性、稳定性、药代动力学等。因此，对其进行检测和定量，尤为重

要。氨基酸分析可通过对实测氨基酸序列和理论序列进行比较，定位可能存在的糖基化或者磷酸化部位，以保证产品的

均一性及临床疗效［3］。

4将氨基酸分析技术运用于实际案例

4.1具体事例简介

以重组蛋白食品为例，在此过程中，需先对样品进行提取和纯化，再利用高效液相色谱或者质谱（MS）技术，酶

解蛋白质，使蛋白质转化成游离氨基酸混合物。接着，对这几种氨基酸进行定量与定性分析，并测定其组成、顺序及具

体氨基酸残基含量。有研究以重组人胰岛素为例，准确测定了各氨基酸所占比例及C端苏氨酸与A链、B链之间二硫

键的状态，保证了产物符合天然胰岛素的结构［4］。

4.2案例研究

根据氨基酸分析数据，可综合评价产品质量。有研究对特定批重组生长激素进行了氨基酸分析，结果表明，目标

蛋白具有较高纯度，且氨基酸组成完全符合预期设计，但疏水性氨基酸所占比例比理论值略大，可能影响药物稳定性。

在此基础上，研究学者提出要优化生产工艺，如调节细胞培养条件、完善纯化步骤等，以减少疏水氨基酸片段生成，进

而提高产物稳定性及活性。另外，如果检测到有异常糖基化位点时，需要进一步探究糖基化修饰过程中的影响因素，并

对生产流程进行调整，以保证产品质量达到预定标准。

5氨基酸分析技术发展动向及前景

5.1新型氨基酸分析技术研究与发展动态

近几年，氨基酸分析技术发展迅速。例如，高效液相色谱技术分辨率、灵敏度高，将其与荧光检测及紫外检测相

结合，可实现复杂样品氨基酸的准确测定；质谱技术，包括液相色谱-质谱联用（LC-MS）和毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）

等,可以提供更为全面的氨基酸序列信息及翻译后修饰状态等信息，具有高通量、高精度等特点。此外，串联质谱（MS/MS）、

多维蛋白质组学技术等生物质谱新技术，也为氨基酸分析提供了更深入的可能。

①液相色谱-质谱联用技术，将高效液相色谱技术与质