细胞生物学3章(沈婷).pptVIP

;研究方法和手段的不断创新推动着科学的开展，每当有一种新的重大技术突破时，即预示着科学将又一次飞跃，所以研究方法是非常重要的。

当今细胞生物学中使用的方法多种多样，但总地来说，可划分为四大类：细胞形态观察的方法〔显微技术〕、细胞组分分析与原位检测技术、细胞培养与细胞工程技术和分子生物学技术等。;细胞生物学研究方法;第一节、研究细胞生物学的模式生物:;病毒：生物大分子互作、基因表达调控、肿瘤的发生与防治

细菌：转基因、基因表达调控

酵母菌：细胞分裂周期调控、蛋白质互作等

线虫：1mm，959cell，3Day，发育生物学、遗传学、基因组学

果蝇：基因保守，与人类基因同源性高

斑马鱼：透明，个体发育与组织形态发生

小鼠：哺乳动物

拟南芥：植物遗传学;;第二节细胞形态结构的观察方法;〔一〕普通光学显微镜;;;普通复式光学显微镜技术;3.分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。

?R=0.61λ/N．A．

–其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率＝ｎsinα/2，n=介质折射率；α=镜口角〔样品对物镜镜口的张角〕。

?思考：如何提高显微镜的分辨能力？;;〔二〕相差显微镜;用途：观察未经染色的玻片标本;微分干预差显微镜Differentialinterferencecontrastmicroscope〔DIC〕;培养物中未经染色的的同一个动物细胞的三个图象。A.普通光学显微镜亮视野看到的。B.微分干预显微镜。C.相差显微镜系统。;特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜；

有两个特殊的滤光片；

照明方式通常为落射式。

特异蛋白质等生物大分子定性

定位研究，标本需特异荧光染料，光源为短波光;落射荧光显微镜的构造;细胞内的天然物质如叶绿素，经紫外线照射后能发出可见荧光----自发荧光。

细胞内某些成分用荧光染料进行染色，在荧光显微镜下也能观察到荧光----诱发荧光。;用途：免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。;荧光显微镜照片〔微管呈绿色、微丝红色、核蓝色〕;用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。

能显示细胞样品的立体结构。

分辨力是普通光学显微镜的3倍。

用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。;〔四〕激光扫描共焦显微镜技术

LaserScanningConfocalMircroscope;laserconfocalscanningmicroscope,LCSM;LCSMImageofaXenopusMelanophore

microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)

:///;荧光共振能量转移〔FRET〕技术〔P55〕;荧光漂白恢复技术〔P56〕;二、电子显微镜;电子显微镜与光学显微镜根本区别;不同光线的波长;〔一〕透射电子显微镜

transmissionelectronmicroscope,TEM;香烟过滤嘴纤维外表的烟雾粒子;血液凝块构造〔红色为红血球，兰色为血小板，黄色为纤维蛋白〕。;TRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPE，TEM;放大200倍的斜纹藻

迈克尔·斯特林格(MichaelStringer)

作品名称：《斜纹藻》(海洋硅藻)(200倍)

拍摄地点：英国艾塞克斯郡滨海韦斯特克利夫

所用技术：暗视野和偏振光

;放大30倍碳纳米管

保罗·马歇尔(PaulMarshall)

作品名称：碳纳米管(30倍)

工作单位：加拿大国家研究理事会

拍摄地点：加拿大安大概湖渥太华

所用技术：立体显微镜技术

;查尔斯·卡兹莱克(CharlesKazilek)

作品名称：日本专业纸纤维(100倍)

工作单位：亚利桑那州大学

拍摄技术：共焦;2、制样技术;;

包埋的样品

;2〕负染技术;3〕冰冻蚀刻freeze-etching;〔二〕扫描电子显微镜;Scanningelectronmicroscope〔SEM〕;工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电子，次级电子的多少与样品外表结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。

为了使标本外表发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。;扫描电子显微镜原理;人类红细胞;酵母;原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压〔2mV~2V