微生物学实验三.pptVIP

抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程Medicalmicrobiology抗酸染色、病毒的接种与培养、真菌菌落形态观察新乡医学院成人高等教育网络课程Medicalmicrobiology基础医学院微生物学教研室屈艳Tel：0373-3029130E-mail：实验三抗酸染色

病毒的接种与培养

真菌菌落形态观察一、实验目的1.掌握抗酸染色方法。2.了解抗酸染色的原理和意义。抗酸染色Acidfaststain分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。12二、实验原理细菌：卡介苗（BacillusCalmette-Guerin，BCG）其它：接种环、酒精灯、载玻片等染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液三、实验材料四、方法与步骤细菌涂片的制备涂片干燥固定染色初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热3～5min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。脱色：3%盐酸酒精脱色30s～1min；用水冲洗。复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。12345五、实验结果碱性美兰未染色初染后脱色后复染后初染石炭酸复红脱色盐酸酒精复染结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。010203无菌操作染色时间初染加热的温度，勿沸腾六、注意事项病毒的接种与培养

真菌菌落形态观察010203了解病毒的培养方法掌握病毒的鸡胚接种及动物接种了解常见真菌的菌落特点实验目的一.病毒的培养动物接种法鸡胚培养法组织细胞培养法病毒的分离培养病毒结构简单，缺乏完整的酶系统，不能在无生命的人工培养基中生长，必须在活的组织细胞中才能增殖。1.动物接种（Animalinoculation）最早应用的病毒培养法。用途：分离鉴定、传代、制备免疫血清。缺陷：带菌，缺敏感动物。常用动物：鼠、家兔、猴和羊等。接种的途径：脑内、鼻内、皮内、腹腔内和静脉注射等。病毒分离材料实验动物接种途径接种后症状脑炎病毒蚊体悬液、尸解脑悬液小鼠脑内、腹腔脑炎咽拭子、粪便悬液、脑脊液、尸解脑悬液乳鼠（小于3d）皮下、脑内、腹腔柯萨奇病毒B组咽拭子、粪便悬液、脑脊液、尸解脑悬液乳鼠（小于24h）皮下、脑内、腹腔震颤、痉挛性麻痹狂犬病病毒唾液、脑悬液小鼠脑内脑炎?常用动物接种分离的病毒及接种途径固定小白鼠：用左手大拇指和食指握住小白鼠的头部，手掌轻轻按住小白鼠的体部。消毒注射部位：右手用棉签蘸以碘酒，消毒小白鼠的右侧颞部皮毛（不碰到眼）。取病毒悬液：用0.25ml注射器取0.1ml病毒悬液，去除注射器内的气泡。小白鼠的脑内接种接种：右手拿注射器在小白鼠颞部（眼与耳根联线的中点略偏耳朵的方向）注入，进入颅腔即可，（一般进针2－3mm）不要插得太深。观察：注射完毕，将用过的注射器放入煮沸消毒器内，煮沸消毒。实验动物置于防蚊设备的室内饲养，逐日观察动物发病情况。处死小白鼠-颈椎脱臼法2.鸡胚接种尿囊腔接种法卵黄囊接种法绒毛尿囊膜接种法羊膜囊接种法接种途径可根据病毒种类选择适宜接种部位，如分离流感病毒常用羊水囊和尿囊同时接种法，而痘病毒常采用绒毛尿囊膜接种法常用鸡胚分离或鉴定的病毒病毒接种途径接种后变化血清学诊断所用材料绒毛尿囊膜痘斑绒毛尿囊膜白斑、核内包涵体流感病毒羊水囊、尿囊产生血凝素尿囊液腮腺炎病毒羊水囊或卵黄囊产生血凝素羊水在检卵灯下观察能否看到清晰的血管；01胚胎是否移动；02若胚龄过长，则需观察其胎盘部分，胎盘部分变苍白说明胚胎死亡，正常时胎盘