肉及肉制品中鸡鸭源性成分的鉴定梯型熔解温度等温扩增检测方法及编制说明.pdfVIP

ICS

CCS

HNSPXH

河南省食品科学技术学会团体标准

T/HNSPXHXXX—XXXX

肉及肉制品中鸡鸭源性成分的鉴定梯型熔

解温度等温扩增检测方法

Identificationofchickenandduck

derivedmaterialsinmeats

andmeatproducts-LMTIAmethod

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

河南省食品科学技术学会发布

T/HNSPXHXXX—XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由河南省食品科学技术学会提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

I

T/HNSPXHXXX—XXXX

肉及肉制品中鸡鸭源性成分的鉴定梯型熔解温度等温扩增检测方法

1范围

本文件规定了肉及肉制品中鸡鸭源性成分的梯型熔解温度等温扩增检测方法。

本文件适用于肉及肉制品中鸡鸭源性成分的定性检测。

本文件所规定方法的检出限（LOD）为0.1%（质量比）。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T9695.19肉与肉制品取样方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法提要

提取样品DNA，用已知含鸡肉、鸭肉成分的样品DNA为阳性对照，已知不含鸡肉、鸭肉成分的样

品DNA为阴性对照，灭菌双蒸水作为空白对照，使用特异性引物和探针，采用梯型熔解温度等温扩增

技术，根据荧光信号和扩增现象，判定是否存在鸡肉、鸭肉成分。

5原理

选择Tm值曲线为梯型（包括人字梯型、半人字梯型和直梯型）的特异性核酸片段为靶序列设计巢

式引物，将巢式引物的外引物与内引物分别连接成一对引物作为等温扩增用引物，借助外引物与核酸靶

序列上对应片段的熔解温度差异提供单链模板，在DNA聚合酶（大片段）催化下通过合成反应与链替

代反应对梯型Tm值曲线的靶标核酸片段进行等温扩增，进行不同肉类成分的定性分析。

6试剂或材料

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除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682中一级水的规格。所有

试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

6.1动物组织DNA提取试剂盒。

6.2梯型熔解温度等温扩增检测LMTIA试剂盒。Proofman探针法

6.3梯型熔解温度等温扩增检测LMTIA的引物和探针。鸡肉、鸭肉引物和探针详见表1。鸡肉和鸭肉

引物扩增的靶标序列参见附录A。

6.4梯型熔解温度等温扩增检测反应混合液（5μL（2X）通用型LMTIA预混液，0.4μL(100U/µL)(U,

Unit，酶学单位)Bst酶）。

表1鸡肉、鸭肉成分鉴