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非靶向代谢组学数据分析操作流程

非靶向代谢组学数据分析操作流程

一、非靶向代谢组学数据分析的前期准备与样本处理

（一）实验设计与样本采集

非靶向代谢组学研究的第一步是科学合理的实验设计。需明确研究目的（如疾病标志物筛查、环境胁迫响应等），确定样本类型（血清、尿液、组织等）和分组方案（病例/对照、时间序列等）。样本量需满足统计学要求，通常每组不少于6个生物学重复。采集过程中需严格控制预冷条件（液氮速冻或-80℃保存），避免代谢物降解。临床样本需记录患者基本信息（年龄、性别、用药史等），动物/植物样本需统一采集部位和处理时间。

（二）样本前处理与质控

样本前处理包括代谢物提取和衍生化两步。提取多采用甲醇-乙腈-水体系（比例常为2:2:1），通过涡旋、超声破碎细胞后离心取上清。针对不同样本需优化提取方案：血浆样本需去除蛋白质（冷丙酮沉淀），植物样本需去除色素（活性炭吸附）。衍生化主要用于GC-MS分析，常用BSTFA或MSTFA硅烷化试剂。质控环节需插入混合样本（QC样本），在检测序列中每隔10个样本插入1个QC，用于评估系统稳定性。

（三）仪器平台选择与参数设置

根据研究需求选择LC-MS（高极性代谢物）或GC-MS（挥发性代谢物）平台。LC-MS推荐采用HILIC色谱柱（检测糖类等极性物质）或C18反相柱（检测脂质类），流动相为0.1%甲酸水-乙腈梯度洗脱，质