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精卵受精原核观察操作常规

1.在精子卵子授精后14-19小时期间观察原核。

2.操作环境：百级净化环境中操作，配备温度37℃加热板的体视镜下观察。

3.挑选合适尖吸管用于剥离“受精卵”外层卵丘细胞（可实验自制或者购买剥卵

针），尖吸管内直径稍微大于卵母细胞的直径。使用尖吸管前请在体视镜观察

尖吸管头部是否完好和内直径是否合适（管内直径120微米左右）。

4.取卵当日为每个IVF/ICSI患者准备胚胎培养皿，每个培养皿周围用卵裂液（如

G1，或G）做8-10个微滴，中间3-4个微滴备冲洗，每个胚胎培养微滴用

液约15ul，其上盖满矿物油。将准备好的胚胎培养皿放入CO2培养箱内平

衡过夜。

5.了解患者过夜精子的情况：如未提示过夜精子培养液中未见较多密集的颗粒

状物，可以开始观察原核操作；如提示过夜精子培养液中可见较多密集的颗

粒状物，可能发生“受精卵”污染，请最后观察，具体操作见补充说明。

6.准备以上条件后，从培养箱取出患者授精的4孔培养皿，与实验室记录单核

对夫妻双方名字及核对所观察的的“卵子”数目。

7.RT受精卵的原核检查，需先剥除外层卵丘细胞。使用前尖吸管可用授精培养

液体润洗下。体视镜下，尖吸管在授精孔吹吐“受精卵”，剥离“受精卵”外层

卵丘细胞。开始时，先剥离一个“受精卵”，如顺利，之后可以3-4个受精卵

一起剥离。

8.原核检查：剥离颗粒细胞后，使用尖吸管将卵母细胞转入备好的胚胎培养皿

内（ICSI受精卵直接转入胚胎培养皿内），在体视镜下（80X）进行原核观察，

如解剖镜下显示不清需在倒置镜下（200X）下观察。

9.将受精卵在中间3个培养滴进行清洗后，按2PN，1PN，0PN（无原核，可为

2pb，MII），MI，GV，3PN/多PN（3个以上原核）等受精情况情况进行分类

放置，每个培养滴放1-5枚胚胎（如果胚胎数超过30建议使用2个及以上培

养皿）。标记核对患者夫妻双方名字于胚胎培养的小皿，与患者四孔培养皿一

直放入培养箱，位置与原来相同。作好受精情况记录，记录包括受精情况，

位置，培养液，观察时间，操作者。

10.如果“受精卵”剥离和观察是在空气环境下，此操作过程不能超过十分钟。

11.一位患者受精观察结束后销毁使用过的尖吸管，开始下一位患者的观察。

补充说明

1．常规受精失败或常规受精率低于20%：观察未受精卵成熟情况；了解过夜精

子的情况，及四孔精子情况，判断是否补救ICSI，和是否发生污染。

2．补救ICSI：如果常规受精失败，或受精率低于20%。

●原则是尽可能保证患者有一次胚胎移植机会。

●常规受精完全失败视卵成熟情况和卵子质量好坏决定是否进行补救ICSI。

●受精率低于20%：

如果正常受精2PN≥2，受精卵形态正常，可以考虑不补救ICSI。

如果正常受精2PN＜2，且有5个以上正常形态MII，建议补救ICSI。

●及时补救ICSI。

●如补救，第二天请先观察补救ICSI受精情况。

3．污染问题：

污染提示：

●过夜精子培养液中见较多密集的颗粒状物。

●受精的4孔培养液有浑浊的情况发生。

●常规受精完全没有受精。

污染观察：倒置显微镜下（200X或400X）下观察确认。

污染处理：第一种情况:4孔培养液中布满大量的颗粒状物，精子大多数不活

动，颗粒细胞贴壁生长差，可以当日行精液及胚胎培养液的细菌

培养鉴定及药敏实验。

第二种情况:如上述情况不是很明显，到D3移植日再观察决定。

这种情况下如果常规完全未受精可以行补救ICSI。

D3观察：●胚胎培养滴中未发现颗粒，移植。

●胚胎培养滴中发现颗粒，不移植，精液及胚胎培养液的细菌培养

鉴定及药敏实验。

●胚胎培养滴中难以确定颗粒，囊胚培养后决定？胚胎冷冻，胚胎

胚胎培养液的细菌培养鉴定？

初步判断污染来源：

●提示精子来源污染；

过夜精子培养液有明显大量颗粒，

培养卵母细胞的四孔中间背景干净，

浸洗卵母细胞培养皿背景干净。