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;(3)无菌
无菌操作：超净工作台、火焰消毒等
培养液中参加抗菌素
器械、溶液消毒〔烤箱、高压灭菌、过滤〕
(4)其他
温度37℃
湿度100%
CO2浓度5%;2.细胞培养的传代
原代培养:直接取材于有机体的细胞培养
取材切割消化培养
传代培养:将原代培养存活的细胞从培养瓶中
取出，以1:2以上的比例扩大培养
原代培养
传代培养(保持分化特性);3.细胞系〔Cellline〕
在细胞培养中，偶然情况下产生的具有无限繁
殖能力，能够无限传代的细胞群。
变异细胞
细胞系HeLa人宫颈癌上皮细胞
3T3小鼠成纤维细胞;4.细胞融合〔Cellfusion〕
〔1〕定义
在自然或人工条件下，使二个或二个以上
细胞合并形成一个细胞的过程。;;C基因定位
D单克隆抗体制备
B淋巴细胞
肿瘤细胞;E细胞周期相关因子的发现;四、细胞组分的分级别离
通过逐级别离对细胞内细胞器和各种成分的
化学性质和功能进行研究的方法。
匀浆
分级别离
分析
;匀浆液;〔一〕离心法
用于别离细胞器和大分子
;
(1)差速离心法
别离对象:不同大小和形状的组分
〔细胞核、细胞器〕
具体方法:由低速到高速逐级沉降(repeat);(2)速度沉降法
别离对象:不同大小、形状的组分(沉降系数S)
比差速离心方法更精细
具体方法:
在离心管中予装5%-20%蔗糖梯度的离心介质
;(3)平衡沉降法
别离对象:密度不同的组分〔与大小、形状无关〕
具体方法：在离心管中予装一定密度梯度的离
心介质〔20%-70%蔗糖、CsCl〕
通常采用超速离心
;;1.离子交换层析
层析介质:阴离子或阳离子树脂
别离原理:电荷
;
2.凝胶过滤层析
层析介质:凝胶
别离原理:分子大小
;
3.亲和层析
层析介质:
基质+抗体
底物
别离???理:
亲和性;4.高压液相层析HPLC
基质粒度小〔3-10μm〕、分辨率高、
别离速度快
;(三)电泳法
主要用于别离蛋白质、核酸
1.琼脂糖凝胶电泳
别离对象:核酸
支持介质:琼脂糖
凝固点40-45℃
不同浓度凝胶具有不同孔径
电泳缓冲液:TAE\TBE
染料:溴化乙锭EB;(三)电泳法
主要用于别离蛋白质、核酸
1.琼脂糖凝胶电泳
别离对象:核酸
支持介质:琼脂糖
凝固点40-45℃
不同浓度凝胶具有不同孔径
电泳缓冲液:TAE\TBE
染料:溴化乙锭EB;2.SDS
别离对象:蛋白质(蛋白质分子量、亚单位组成)
样品处理:SDS阴离子外表活性剂
β-巯基乙醇复原剂
大小
电荷
形状
支持介质:丙稀酰胺
甲叉双丙稀酰胺
染色:考马斯亮蓝
银染
特异性蛋白(westernblotting);;S
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