T_CSTM 00999-2023 玉米褪绿斑驳病毒 形态学检测 透射电子显微镜法.docxVIP

ICS65.020.01CCSN33

团体标准

T/CSTM00999—2023

玉米褪绿斑驳病毒形态学检测

透射电子显微镜法

Maizechloroticmottlevirus--Morphologicalidentificationmethod--

Transmissionelectronmicroscopy

2023-12-15发布2024-03-15实施

中关村材料试验技术联盟发布

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前言

本文件参照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》，GB/T20001.4《标准编写规则第4部分：试验方法标准》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）提出。

本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）归口。

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引言

玉米褪绿斑驳病毒（maizechloroticmottlevirus,MCMV）是侵染玉米的重要检疫性病毒病原，被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》。该病毒与马铃薯Y病毒科（Potyviridae）的几种病毒之一复合侵染引起的玉米致死坏死病（cornlethalnecrosis，CLN），是玉米生产的毁灭性病害，一旦发生将带来严重的经济损失。MCMV为直径30nm的二十面体对称球状粒子，可经汁液、介体叶甲和蓟马传播，也可经种子传播，田间扩散容易，在病毒分类学上归属于类番茄丛矮病毒目（Tolivirales）、番茄丛矮病毒科（Tombusviridae）、玉米褪绿斑驳病毒属（Machlomovirus）（附录A）。应用透射电子显微镜可观察其形态结构以及细胞病理学特征，是验证抗体检测和分子检测结果的重要形态学检测依据。透射电镜制样方法的细节以及制样质量直接关系到该病毒的形态成像及正确鉴定，为了正确指导玉米褪绿斑驳病毒形态学检测诊断工作，特制定该病毒透射电子显微镜形态学检测方法的标准。

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玉米褪绿斑驳病毒形态学检测透射电子显微镜法

重要提示：使用本文件的人员应有植物病毒检测能力的实验室工作实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件规定了应用透射电子显微镜对玉米褪绿斑驳病毒进行形态学检测的方法。

本文件适用于玉米褪绿斑驳病毒的形态学鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T31810玉米褪绿斑驳病毒检疫鉴定方法

JY/T0581透射电子显微镜分析方法通则

SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法

SN/T2964植物病毒检测规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

病毒virus

由核酸和蛋白质外壳组成，具有侵染活性并能够在寄主细胞内复制的非细胞生物。3.2

病毒粒子virion

成熟的或结构完整、具有侵染性的病毒个体。

3.3

玉米褪绿斑驳病毒maizechloroticmottlevirus

MCMV

一种严重侵害玉米等作物的检疫性植物病毒，详见附录A。

3.4

抗原antigen

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能刺激动物机体产生抗体和致敏淋巴细胞并能与之发生特异性免疫结合反应的物质。3.5

抗体antibody

动物机体受到抗原刺激而产生的、能与相应抗原发生特异性免疫结合反应的一种免疫球蛋白。3.6

负染色negativestain

采用高密度的重金属盐染色液提高生物样品颗粒背景电子密度的染色方法。

3.7

免疫电子显微术immunoelectronmicroscopy

利用抗原抗体特异性结合的原理在超微结构水平上定位、定性及半定量显示抗原的技术方法，分为免疫复合物电镜技术和免疫标记电镜技术两大类。

3.8

超薄切片术ultrathinsectiontechnique

采用超薄切片机把经过包埋后的样品切成厚度为50nm~100nm薄片的方法。

4原理

4.1负染色技术原理：采用高密度的重金属盐染色液（如磷钨酸、醋酸双氧