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方法：

C产品是一种表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）的抑制剂，能特异性

的识别和结合细胞膜上的EGFR，从而竞争性阻断EGFR的配体的结合。本方法采用间接

ELISA原理，在96中包重组EGFR抗原，依次加入待测品和酶结合二抗，用酶底物显

色法检测待测品与EGFR抗原的结合量，从而计算待测品的结合活性。

范围：

本标准操作程序适用于宝船生物（）生产的C项目产品（原液、制剂成

品）与重组人EGFR的结合活性的检查操作。

职责：

操作人员：

严格按照此规程要求进行操作。

岗位主管：

起草文件，并确保操作程序的准确性、技术内容的完整性及文件的及时更新；

监督操作规程是否与实际过程一致，资源是否满足要求；

培训，确保此操作规程的正确实施。

程序：

1材料与设备

1.1试剂和材料

1.1.11×PBS：自配试剂

1.1.210×PBS：自配试剂

1.1.3Tween-20：吐温-20，（Amresco，0777-1L）

1.1.4洗液：(PBS,0.1%Tween-20)，自配试剂

1.1.5试验缓冲液：(PBS,0.05%Tween-20)，自配试剂

1.1.6TMB原液：（1.5mg/mlTMBinDMSO），自配试剂

1.1.70.03%HO：自配试剂

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1.1.80.2M醋酸钠：自配试剂

1.1.9终止液：2MHSO，自配试剂

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1.1.10包被物：重组人EGFR抗原（强邦生物，QRE-101）

1.1.11参比品：西妥昔单抗(Merck)

1.1.12酶结合物：HRP标记的驴抗人IgG-Fc抗体（Jackson，709-035-098）

1.1.13封闭液：（PBS，0.1%BSA，0.1%Tween-20），自配试剂

1.2设备

1.2.196孔微量板板条（1×12孔）（，XDI）

1.2.2酶标仪ThermoMax（MolecularDevices）

1.2.3摇床（Heidolph）

1.2.4洗板机（汇松PW-960）

2试验步骤

2.1根据《ELISA检测试剂配制标准操作程序》(SOP-QC-032)配制和准备实验所需试剂。

2.2包被：计算所需板孔数量及所需包板液。用1×PBS稀释EGFR至2µg/ml,加入到96

中，50µl/孔。2-8°C过夜。

2.3

2.4封闭：200µl/孔封闭液，室温1小时，同时震摇。

2.5洗板：操作洗板机，用洗板液洗板5次，250µl/孔。洗板机操作方法同2.2。

2.6稀释标准品、样品和参比品。根据下表所列的上样终浓度,分别将标准品、样品和参比品

稀释成倍比起始浓度；再分别作等倍的倍比稀释至所需终浓度。

样品类别浓度梯度倍比起始浓度(ng/ml)终浓度（ng/ml）

标准品（标准曲线）71010,5,2.5,1.25,0.63,0.31,0.16

样品（待测品）444,2,1,0.5

参比品344,2,1

参考样品最小稀释度，稀释上样

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