〖生物〗基因工程的基本操作程序课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

基因工程的基本操作程序第三章第二节

本节聚焦基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？01基因工程操作的每一步设计的技术和方法有哪些？02

从社会中来1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。转基因抗虫棉抗虫的机制是什么？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤?

从社会中来Bt抗虫蛋白Bt基因取出？转移？

从社会中来普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉

（有抗虫特性）导入Bt基因重组DNA分子目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定与载体拼接

第一步：目的基因的筛选与获取筛选合适的目的基因目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。主要是编码特定蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关基因。

第一步：目的基因的筛选与获取筛选合适的目的基因从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选目的基因明确Bt基因的序列信息，对Bt抗虫蛋白有深入了解利用序列数据库（如GenBank）、序列对比工具（如BLAST）等，找到合适的目的基因

第一步：目的基因的筛选与获取筛选合适的目的基因获取目的基因的方法人工合成目的基因通过构建基因文库来获取目的基因基因比较小、核苷酸序列已知的序列，通过DNA合成仪用化学方法直接合成。

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因PCR-聚合酶链式反应：根据DNA半保留复制的原理，通过在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因核苷酸序列进行大量复制的技术。

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因各种组分耐高温的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）DNA模板引物（2种）稳定的缓冲溶液四种脱氧核苷酸(dNTP)引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸一般添加Mg2+（激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶）

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因dATP与ATP在结构上有什么区别？dATP为什么能用作DNA复制的底物？ATP结构中的五碳糖为核糖，而dATP结构中的五碳糖为脱氧核糖。ATP转移掉两个磷酸基团后剩下的结构就是腺嘌呤核糖核苷酸，

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因PCR反应过程3’5’3’5’3’5’3’5’A.变性温度上升到90℃以上，双链DNA解聚为单链。B.复性温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。C.延伸温度上升到72℃左右，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因PCR反应过程第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸产生第二轮循环的产物；第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸产生第三轮的产物；第二轮循环的产物第三轮循环的产物

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因PCR结果：PCR产物检测：由于一个循环得到的产物又可以作为下一个循环的模板，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍。即成形式扩增约为，其中n为扩增循环的次数。指数2n变性90℃以上延伸72℃左右复性50℃左右常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物。

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因下图是某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)，都不合理，请分别说明理由。第1组：引物Ⅰ和Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而失效第2组：引物Ⅰ′自身折叠后会因出现局部碱基互补配对而失效要保证目的基因能与载体相连接，还要对引物进行什么操作？要在两种引物的5′端分别添加上限制酶的识别序列。如果循环n次，则共需消耗多少对引物？共需消耗2n－1对引物。

第一步：目的基因的筛选与获取利用PCR获取和扩增目的基因利用PCR技术扩增目的基因，在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段？比例是多少？5’3’5’5’第一次循环第二次循环3’5’第三次循环3’3’第3轮；1/4。

PCR中的数量关系复制次数123nDNA分子数含引物的DNA分子数含其中一种引物的DNA分子数同时含两种引物的DNA分子数共消耗引物的对数含脱氧核苷酸链等长的DNA分子数2482n2482n1＝21－13＝22－17＝23－12n－10＝21－22＝22－26＝23－22n－21＝21－13＝22－17＝23－1