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AKTA蛋白纯化层析培训演讲人：日期：

CATALOGUE目录CATALOGUE目录AKTA纯化系统概述层析技术基础AKTA纯化系统操作蛋白纯化策略仪器维护与故障排除实践与案例分享培训总结与答疑

AKTA纯化系统概述01

AKTA纯化系统一种基于层析技术的蛋白质分离纯化系统，广泛应用于生物制药、生命科学等领域。功能特点系统具备高效、自动化、灵活等特点，可实现样品的分离、纯化、浓缩等过程。仪器简介与功能

用于分离和纯化蛋白质、抗体、疫苗等生物大分子，提高产品纯度和收率。可用于蛋白质组学、结构生物学、生物化学等领域的研究，揭示生命活动的分子机制。在食品工业中可用于功能性蛋白的提取和纯化，提高食品的营养价值和安全性。系统具有高分辨率、高重复性、易于操作等显著优势，可大大提高实验效率和结果准确性。应用领域与优势生物制药生命科学食品安全优势

AKTA纯化系统主要由层析柱、泵、检测器、收集器等组件组成，各组件协同工作实现样品的分离纯化。系统组成系统采用层析技术，利用不同物质在层析柱中的吸附和解吸能力差异，通过改变洗脱条件将目标蛋白与其他杂质分离。同时，系统通过检测器实时监测流出液的成分，确保目标蛋白的准确收集。工作原理系统组成与工作原理

层析技术基础02

层析原理与分类层析分类根据分离原理和操作方式的不同，层析可分为吸附层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等多种类型。层析原理层析是一种利用不同物质在固定相和流动相之间分配差异进行分离的技术。

填料种类常见的层析填料包括硅胶、氧化铝、活性炭、离子交换树脂、凝胶等。填料选择根据目标产物的理化性质和分离要求，选择合适的层析填料。例如，对于蛋白质等大分子物质，常选择凝胶作为填料。常见层析填料与选择

层析柱的使用层析柱是进行层析分离的主要设备，使用时要保持柱体垂直，控制适当的流速和压力，确保分离效果。层析柱的维护层析柱的使用与维护定期清洗层析柱，避免填料污染和堵塞；注意填料的保存和使用条件，避免受潮、霉变等情况发生；根据不同层析类型和要求，选择合适的层析柱类型和规格。0102

AKTA纯化系统操作03

检查仪器各部件检查AKTA纯化系统各部件是否完好无损，连接是否正确，确保仪器正常运行。清洗系统使用适当的缓冲液清洗整个系统，以去除仪器中残留的污染物和气泡。设定参数根据实验需求，设置合适的参数，如流速、压力、温度等，确保实验的稳定性和重复性。仪器校准使用标准品进行仪器校准，以确保仪器测量结果的准确性。仪器启动与参数设置

样品加载与纯化流程样品准备将待纯化的蛋白质样品进行适当的处理，如过滤、浓缩等，以确保样品符合AKTA系统的要求。样品加载将处理好的样品加载到AKTA系统中，通过系统泵入层析柱进行纯化。梯度洗脱根据蛋白质的吸附特性，设置合适的梯度洗脱程序，以充分分离目标蛋白和其他杂质。收集纯化蛋白根据洗脱结果，收集目标蛋白的洗脱液，并进行后续处理，如浓缩、除盐等。

数据收集在纯化过程中，及时收集并记录实验数据，如层析柱的洗脱曲线、蛋白的紫外吸收峰等。结果分析与讨论根据实验结果，分析蛋白的纯化效果和纯度，并探讨可能的影响因素和优化方法。报告撰写将实验结果整理成报告，包括实验目的、方法、结果和结论等，以便与他人交流和参考。数据处理利用AKTA系统自带的软件或相关数据分析工具，对实验数据进行处理和分析，如计算蛋白的纯度、回收率等。数据处理与结果分蛋白纯化策略04

纯化目标与方案设计纯度要求根据实验需求，确定需要纯化的目标蛋白的纯度级别。纯化策略选择合适的纯化方法，如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等。实验设计制定详细的实验流程，包括纯化步骤、缓冲液选择、洗脱条件等。

样品准备确保样品来源一致，处理过程中避免蛋白降解或失活。样品预处理与优化样品处理去除样品中的杂质，如细胞碎片、核酸、多糖等，以提高纯化效率。优化条件根据蛋白性质，调整样品处理条件，如pH值、离子强度、温度等。

纯化中的常见问题与解决方案可能是由于杂质与目标蛋白结合力强，可尝试改变洗脱条件或增加纯化步骤。纯度不高可能是由于蛋白在纯化过程中降解或沉淀，可优化缓冲液配方或添加保护剂。蛋白丢失可能是由于纯化柱的选择不当或柱效降低，可更换合适的纯化柱或重新装填柱料。纯化效率低

仪器维护与故障排除05

检查系统泄漏定期检查AKTA蛋白纯化层析系统中的管路、接头和阀门，确保无泄漏。清洁管路和阀门使用适当的清洁剂或溶剂清洗管路和阀门，确保无残留物。更换滤膜定期更换系统中的滤膜，以防止堵塞和污染。检查泵和传感器定期检查泵和传感器的工作状态，确保其正常运转。日常维护与保养

常见故障识别与处理流量不稳定检查泵、阀门和管路是否正常，排除堵塞或泄漏。压力异常升高检查管路是否堵塞，检查阀门是否开启过大或过小，检查泵是否正常工作。分离效果差检