病毒DNA的提取与检测方法.docx

摘要

双生病毒是植物病毒中唯一一类具备双生颗粒物形状的单链DNA病毒，且其寄主范围窄小且产生一般局限性在区域内。而最近因为双生病毒在全世界范畴内导致的明显的损害，已愈来愈得到我们的关注。因此本论文在我国河南、河北和天津地域及广西产生的双生病毒展开了DNA提取和检测。

依据已报导的双生病毒感染序列设计引物，对来源于河南省、河北省及天津市的52份西红柿样品展开PCR检验，数据显示50份样品扩增到了长约800bp的特异片段，患病率为96.2％。根据序列测量，得到44份样品的777bp详细外壳蛋清基因序列，序列间的相似性达99.45%，运用GenBank数据库查询中的BLAST程序流程展开相似性查找，与其说相似性高的均为西红柿失绿曲叶病毒感染(Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV)分离物，与TYLCV上海市分离物SH2(AM282874)、河南省分离物HNSQ(JF414237)、河北省分离物HBBD(JN990922)、山东省分离物SD2A-7(GU199587)、浙江省分离物ZJ6(AM698118)和安徽省分离物AH-HB1(FN650807)等的外壳蛋清基因序列相似性均为99%以上，基本推论，检测阳性样品被TYLCV浸染。

关键词：双生病毒；DNA检测；DNA鉴定

目录

TOC\o1-3\h\u引言 2

第一章相关概念 3

1.1双生病毒命名 3

1.2双生病毒的分类 3

1.2.1玉米线条病毒属 3

1.2.2甜菜曲顶病毒属 3

1.2.3番茄伪曲顶病毒属 4

1.2.4菜豆金色花叶病毒属 4

1.3双生病毒与小分子DNA形成的病害复合体 5

1.3.1病毒的缺陷型分子 5

1.3.2DNAα分子 5

1.3.3DNAβ分子 5

第二章三个省区番茄黄化曲叶病病原分子鉴定 7

2.1实验材料与仪器 7

2.1.1供试材料 7

2.1.2菌株和质粒 7

2.1.3主要试剂 7

2.1.4主要溶液的配制 7

2.1.5主要仪器 8

2.2实验方法 8

2.3结果与分析 12

第三章广西稀签黄脉病毒的分子鉴定 14

3.1材料与方法 14

3.1.1病毒分离物 14

3.1.2DNA-A全长基因组的PCR扩增、克隆和序列测定 14

3.1.3DNA-B组分和DNA1分子的检测 14

3.1.4DNA-B全长基因组的PCR扩增、克隆和序列测定 14

3.1.5序列分析 14

3.1.6序列重组分析 15

3.2结果与分析 15

3.2.1病毒基因组DNA-A的结构特征及进化分析 15

3.2.2卫星DNAβ分子的检测、结构特征和进化分析 15

第四章结论 19

参考文献 20

致谢 21

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引言

双生病毒是植物病毒中唯一的一类具备双生颗粒物形状的多肽链环状DNA病毒，病毒颗粒的尺寸约为18nm×30nm，无外膜；基因为双组分或组份构造，尺寸为2.5-3.0kb：通常由虫类介体以持续性方法散播。

双生病毒一般出现在亚热带、亚热带地区，温带气候地域也偶有发生。近些年，因为国际性间贸易行动的加强，全球气候变暖和耕作制度的更改，造成了这类病毒在全球范畴内普遍发生并给农作物生产产生了巨大损失，如1991-1992年，美国佛罗里达州，仅在番茄上双生病毒导致的亏损就达到1.4亿美金。1992年至1997年，巴基斯坦因棉絮曲叶病毒的伤害造成棉絮损害达到50亿美金，非洲木薯每一年因双生病毒危害的损害为13-23亿美金。现阶段，早已在亚热带非洲、地中海山间盆地、东亚、南亚、中北美及加勒比海地域等地时兴泛滥，并已经向附近未感染地域拓展，已在好几个发达国家中导致了明显的社会经济和社会热点问题。

我国早在1965年就报导了广东番茄上面有能经白粉虱散播的病毒，直到1982年龚祖陨等根据电子显微镜观察到烟草公司曲叶病毒双生颗粒物后，才确认了双生病毒在中国的出现。但那时候这类病毒在中国发生范畴小、危害不大，并没有造成我们的关注。自20世纪90时期起，广西、云南和海南等地陆续发觉烟草公司、番茄、冬瓜和木瓜等多种多样农作物遭到双生病毒危害。在云南，双生病毒造成的香料烟曲叶病在部分田园病株率达70%以上，在滇南烟区一部分烟叶上病株率达15%-30%，造成烟草公司生产量、品质的严重损失。而在广西的木瓜和番茄上病发也很广泛，病发比较严重地域病株率达到30%-50%，有的田园100%主茎得病，严重损失。依据2019年的调研，这种农作物双生病毒病虫害有逐渐上涨的发