毛细管电泳原理及分析策略CE.pptxVIP

毛细管电泳分离原理及分析策略

01毛细管区带电泳（CZE）02毛细管胶束电动色谱（MECC/MCKC）03毛细管凝胶电泳（CGE）04毛细管等电聚焦（cIEF）05亲和毛细管电泳（ACE）06毛细管电色谱（CEC）CE分离原理-与模式有关

第一章毛细管区带电泳样品在电解液中泳动,根据物质的荷/质比差异来进行分离，比值愈大,跑得愈快

压力进样电动进样浓缩进样进样方式

毛细管种类非涂层毛细管（裸管）内壁涂层毛细管（涂层管）

非涂层毛细管-电渗流的概念

-H+高pH低pH

电渗流的特点EOF

纯电泳状态+

电泳+电渗流tm(min)EOF+0

电渗流的作用

电渗流的活塞流特点HydrodynamicflowParabolicResistancetoflowatsurfaceMorediffusion/broaderdetectionzoneEOFgivesplugflowMinimizesbandbroadeningNarrowsdetectionzone

电渗流的活塞流特点”HydrodynamicflowParabolicResistancetoflowatsurfaceMorediffusion/broaderdetectionzoneEOFgivesplugflowMinimizesbandbroadeningNarrowsdetectionzone

电渗流是CE中最大的驱动力来源之一

正面作用01增加分离速度02使得正、负电荷物质同时分离03负面作用04减少分离时间和分离有效距离05电渗流的波动极大的影响了迁移时间的重复性06电渗流的正面及负面作用

pH越高，电渗流越大离子强度越高，电渗流越小离子型表面活性剂、有机溶剂、环糊精离子强度pH值缓冲溶液添加剂影响电渗流的因素

电渗流随pH的变化情况

采用涂层毛细管，消除电渗流的影响01改变pH，从而调整电渗流的大小。pH3时电渗流很低；当pH10以后，电渗流基本不增加02添加剂：有机溶剂可以降低电渗流的大小，从而增加分离的有效距离；表面活性剂可以彻底改变电渗流的方向和大小，主要是在阴离子分析时使用03控制电渗流的三个重要手段

缓冲溶液的影响和选择在CE中应该根据以下性质来选择缓冲溶液：在所选的pH范围内有较强缓冲能力；在检测波长处有低的紫外吸收；小的淌度（即大体积、低电荷离子）以降低所产生的电流。那些被称为生物“优良缓冲液”的，如Tris,borate,CAPS等特别有用，因为这些缓冲溶液中的离子一般较大，能够在较高浓度下使用而不会产生大的电流，但一个潜在的缺点是这些大的缓冲离子有强的紫外吸收。

磷酸钠体系宽缓冲范围Tris-HCl体系低pH范围硼酸钠体系高pH范围醋酸-醋酸铵体系CE/MS常用体系常用的CE缓冲体系

毛细管类型--涂层还是非涂层？01毛细管长度--长毛细管还是短毛细管？02缓冲液体系--种类和pH值03添加剂类型--甲醇|环糊精|乙腈04检测器选择--紫外|二极管阵列|激光诱导荧光05CZE分离条件的选择

缓冲溶液的选择可先用磷酸缓冲体系为搜寻基础，初步确定（最佳）pH范围后，再进一步细选出更好pH和缓冲试剂。磷酸盐是毛细管电泳中最常用的缓冲体系之一，它的紫外吸收低，pH缓冲范围比较宽（pH=1.5～13），但电导也比较大。

缓冲溶液及pH值的选择研究经验表明：对于蛋白质、肽和氨基酸等两性样品，采用酸性（pH2）或碱性（pH＞9）分离条件，比较容易得到好的分离结果；糖类样品通常在pH=9～11之间能获得最佳分离；羧酸或其他样品多在pH=5～9之间选择分离条件。

缓冲溶液及pH值的选择pH的选择也和所用的毛细管种类有关，许多涂层毛细管只能在一定的pH范围内工作，例如聚丙烯酰胺涂层毛细管，在3＜pH＜8的范围以外工作，其涂层容易水解失效。

缓冲溶液及pH值的选择在相同的pH下，不同缓冲体系的分离效果不尽相同，有的可能相差甚远。一般的经验是，能与样品发生相互作用的试剂，有可能就是最好的试剂。一个典型的例子是，在分离糖类和DNA等分子时优先使用硼酸盐缓冲体系，因为硼酸根能与糖羟基形成配位键，从而增加糖的负电荷和分离度。硼酸缓冲试剂也适用于其他含邻位羟基或多羟基化合物的分离。

缓冲溶液及pH值的选择缓冲试剂及pH调节剂的浓度也需要优化。缓冲试剂的浓度一般控制在10～200mmol/L之间。电导率高的缓冲试剂如磷酸盐和硼砂等，其浓度多控制在20mmol/L附近，而电导小的试剂如硼酸及HEPES等，其浓度可在100mmol/L以上。有时为了抑制蛋白质吸附等特殊目的，可采用很高（＞0.5mol/L）的试剂浓度，此时要注意减少分离电压，分析速度自然也将随之降低。

目的：01