DB51T 2458-2018 大鲵蛙病毒病诊断技术规程.docxVIP

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ICS65.150B52

DB51

四川省地方标准

DB51/T2458—2018

大鲵蛙病毒病诊断技术规程

2018-04-18发布2018-05-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T2458—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂和材料 1

5设备和器械 2

6临床检查 2

7实验室样品采集 2

8病毒分离 2

9病毒鉴定 3

10综合判定 4

附录A(规范性附录)试剂配方 5

附录B(资料性附录)大鲵蛙病毒MCP基因参考序列(531bp) 6

Ⅱ

DB51/T2458—2018

前言

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规定进行编写。本标准中附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：四川农业大学。

本标准起草人：耿毅、刘丹、余泽辉、陈德芳、黄小丽、欧阳萍、邓梦玲。

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DB51/T2458—2018

大鲵蛙病毒病诊断技术规程

1范围

本标准规定了大鲵蛙病毒病诊断的术语与定义、试剂和材料、临床检查、实验室样品采集、病毒分离、病毒鉴定和综合判定等技术规程。

本标准适用于大鲵蛙病毒病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于文件的应用时必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SC/T7014水生动物检疫实验技术规范

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于此文件。3.1

大鲵蛙病毒病

指由大鲵蛙病毒(Chinesegiantsalamanderranavirus,CGSRV)感染引起的大鲵发病或死亡的一

种病毒性疾病。3.2

CPECytopathiceffect

细胞病变效应。3.3

EPCEpitheliomapapulosumcyprini

鲤鱼上皮瘤细胞。3.4

MCPMajorcapsidprotein基因主要外膜蛋白基因。

4试剂和材料

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4.1水

用水应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2试剂与培养基

按GB/T4789.28与SC/T7014规定执行。鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)、小牛血清(FBS)、M199营养液、青霉素、链霉素、Mix-reactionbuffer、DNA分子量标准参照物与核酸提取试剂盒等选用专业试剂公司提供的商品化试剂，上述未提及的见附录A。

4.3引物

MCP基因序列PCR扩增引物：P1-F:5-GACTTGGCCACTTAGA-3’,P1-R:5-GTCTCTGGAGAAGAGAA-3’。

-20℃保存。

5设备和器械

主要设备与器械如下：

解剖盘、剪刀、镊子和手术刀、组织匀浆器、电子天平、高压灭菌锅、超净工作台、普通冰箱、超低温冰箱、一次性滤器(0.22μm)、倒置显微镜、高速冷冻离心机、微量移液器、PCR扩增仪、水平电泳系统、凝胶成像系统与CO?培养箱等。

6临床检查

6.1临床症状

病鲵食欲减退，摄食减少，甚至停止摄食，部分病鲵出现呕吐，偶尔呕吐物混有血液；体表粘液分泌增多，活动缓慢，反应迟钝，常静卧池底。

6.2外部检查

病鲵全身性肿胀、出血，尤其头部与四肢明显，体表皮肤与肌肉溃烂，形成溃疡，严重时肿胀的四肢溃烂。

6.3剖检

口腔黏膜偶见出血与溃疡；腹腔常见淡黄色澄清或含血液体；肝肿大，淤血、出血，呈花斑状；脾肿大，严重瘀血呈紫黑色或散在灰白色坏死灶；肾肿大，斑点状出血；肺囊充血、出血；胃肠道呈出血性一卡他性炎。

7实验室样品采集

样品采集按SC/T7103与GB/T18088执行。体长≤5cm的大鲵苗取整条，体长5-10cm的大鲵苗取内脏(包括肾),体长≥10cm的大鲵则取肝、脾、肾。

8病毒分离

8.1样品处理

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