药典高效液相色谱.pptVIP

第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日定义高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内,各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。*第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日一、对仪器的一般要求和色谱条件所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定*仪器包括：储液器泵进样器色谱柱检测器第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日色谱柱反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。*第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日色谱柱填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10μm之间。粒径更小（约2μm）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。*第5页，共28页，星期日，2025年，2月5日注意以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃流动相的PH值应控制在2~8的。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH值大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、有机-无机杂化填充剂当需使用PH值小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂*第6页，共28页，星期日，2025年，2月5日检测器最常用的检测器为紫外检测器，包括二极管阵列检测器、其他常见的检测器有荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与供试品溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与供试品的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录供试品的吸收光谱，故可用于供试品的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。*第7页，共28页，星期日，2025年，2月5日检测器紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与供试品溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与供试品溶液的浓度通常呈指数关系，故进行计算时，一般需经对数转换。不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应符合紫外—可见分光光度法（附录VA）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。*第8页，共28页，星期日，2025年，2月5日二极管阵列检测器（diodearraydetector，DAD）第9页，共28页，星期日，2025年，2月5日特点：在任一时间内，均可同时得到物质在不同波长下的吸收情况，即三维图谱第10页，共28页，星期日，2025年，2月5日多组分混合物的三维图谱第11页，共28页，星期日，2025年，2月5日第12页，共28页，星期日，2025年，2月5日第13页，共28页，星期日，2025年，2月5日流动相反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统（采用紫外末端波长检测时，首选乙腈-水系统），如经试用不适合时，再选用其他溶剂系统。应尽可能少用含有缓冲液的流动相由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常应不低于5%，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。*第14页，共28页，星期日，2025年，2月5日二、系统适用性试验

色谱系统的适用性试验通包括理论板数分离度重复