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选修3《现代生物科技专题》学问点总结

专题1基因工程

基因工程的概念

基因工程是指依据人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因术，给

予生物以新的遗传特性，创建出更符合人们须要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在

DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组术。

(一)基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)

(1)来源：主要是从原核生物中分别纯化出来的。

(2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核甘酸序列，并且使每一条链中特定部位

的两个核昔酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

(3)结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

2.“分子缝合针”——DNA连接酶

⑴两种DNA连接酶(E•coliDNA连接酶和T4.DNA连接酶)的比较：

①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区分：E・coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的

磷酸二酯键连接起来；而T,DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效

率较低。

⑵与DNA聚合酶作用的异同：

DNA聚合酶只能将单个核昔酸加到已有的核甘酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接

酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

DNA连接酶DNA聚合酶

不同点连接的双链单链

DNA

模板不要模板要模板

连接的对2个DNA片段单个脱氧核甘酸加到已存在的单链

象DNA片段上

相同点作用实质形成磷酸二酯键

化学本质蛋白质

3.“分子运输车”——载体

(1)载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

(2)最常用的载体是质粒，它是一种袒露的、结构简洁的、独立于细菌染色体之外，并具有

自我复制实力的双链环状DNA分子。

(3)其它载体：入噬菌体的衍生物、动植物病毒

(二)基因工程的某本操作程序

第一步：目的基因的获得

1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。

2.原核基因实行干脆分别获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转

录法一和化学合成法

3.PCR技术扩增目的基因

(1)PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片的核酸合成技术。

(2)目的：获得大量的目的基因

(3)原理：DNA双链复制

(4)过程：第一步：加热至90〜959DNA解链为单链；

其次步：冷却到55〜6CTC,引物与两条单链DNA结合；

第三步：加热至70〜751,热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。

(5)特点：指数(2B形式扩增

其次步：基因表达载体的构建(核心)

L目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达

和发挥作用。