《生物技术制药》第4章 抗体制药-教学课件（非AI生成）.ppt

2.6抗体在核酸诊断中的应用热启动PCR热启动PCR技术是近几年发展起来的,是对传统PCR技术的革新。它的问世较圆满地解决了传统PCR中的非特异性扩增问题。*B思考题1、熟悉抗体在免疫诊断中的应用形式。2、自我学习抗体的标记技术。*B2.1免疫荧光技术直接法优点：直接定位、特异性高、快速；联合应用不同的荧光素可以同时检测数种抗原缺点：灵敏度偏低，每一种抗原需制备相应的特异荧光抗体在同一细胞组织标本上需要同时检查两种抗原时要进行双重荧光染色，一般均采用直接法，将两种荧光抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合，加在标本上孵育后，按直接法洗去未结合的荧光抗体，可以明确显示两种抗原的定位。荧光免疫技术的类型及原理BiotechnologicalPharmaceutics*B2.1免疫荧光技术荧光免疫技术的类型及原理间接法优点：一种荧光抗体能检查多种抗原，敏感性高BiotechnologicalPharmaceutics*B2.1免疫荧光技术流式细胞技术BiotechnologicalPharmaceutics*B2.1免疫荧光技术C-Reactiveprotein荧光免疫层析BiotechnologicalPharmaceutics*B放射免疫技术是将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来建立的检测技术。2.2放射免疫分析1959美国YalowBerson1960英国Ekim’s1977获诺贝尔医学生物学奖医学生物学超微量分析的里程碑BiotechnologicalPharmaceutics*B放射免疫分析（radioimmunoassay,RIA）免疫放射分析（immunoradiometricassay,IRMA）特点:灵敏度高(10-9-10-15g/L)、特异性强、重复性好等2.2放射免疫分析BiotechnologicalPharmaceutics*B2.2放射免疫分析BiotechnologicalPharmaceutics*B2.2放射免疫分析BiotechnologicalPharmaceutics*B测定模式采用定量的标记抗原（Ag＋）和非标记抗原（Ag）竞争性结合有限量特异性抗体（Ab）的反应。2.2放射免疫分析BiotechnologicalPharmaceutics*B定义：用胶体金颗粒标记已知抗体或抗原，检测标本中未知抗原或抗体的技术。原理：金免疫标记技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。2.3胶体金免疫分析BiotechnologicalPharmaceutics*B胶体金的基本特性胶体金（金溶胶）：是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒表面带有较多电荷，用胶体金颗粒标记抗体，检测组织或细胞标本中的抗原。2.3胶体金免疫分析BiotechnologicalPharmaceutics光吸收性：胶体金的光吸收峰波长随颗粒的大小而变化呈色性：不同大小的胶体金呈现不同的颜色小颗粒--橙黄色中等颗粒—酒红色较大颗粒—深红色大颗粒—紫色*B2.3胶体金免疫分析胶体金的制备胶体金（colloidalgold）的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶（goldsolution）。最常用的制备方法：柠檬酸盐还原法通过改变柠檬酸钠的用量可制得不同大小的胶体金颗粒BiotechnologicalPharmaceutics*B检测方法2.3胶体金免疫分析根据检测装置的不同，可分为：胶体金斑点渗滤试验（IFA）：穿流形式胶体金斑点免疫层析试验（ICA）：横流形式ICA：将各种反应试剂(抗体)附着在硝酸纤维素膜条上，检测时将待检标本加在膜条的一端，使膜条上的胶体金标记抗体溶解后，与标本中的待测物质反应形成IC，并通过毛细管作用在膜条上渗滤、移行，再与膜上另一种抗体反应，再后