免疫学技术在食品科学中的应用.ppt

免疫印迹技术(Immuno-blotting)SDS蛋白质转印酶免疫测定可应用于蛋白质提取及分析等许多方面。三项技术结合而成。第31页，共53页，星期日，2025年，2月5日免疫印迹技术(Immuno-blotting)CBBImmunoblottingLWPCLWPC第32页，共53页，星期日，2025年，2月5日酶免疫组化技术以酶标抗体与组织或细胞的抗原进行反应，结合形态学检查，对抗原进行定性、定量或定位检测的技术。用于测定组织或细胞表面的抗原。第33页，共53页，星期日，2025年，2月5日3.免疫标记技术酶标记免疫学分析EIA放射线标记免疫学分析RIA免疫荧光法IF第34页，共53页，星期日，2025年，2月5日放射线标记免疫学分析RIA用放射性同位素标记抗原或抗体进行免疫学检测的免疫标记技术。该法灵敏度高达pg。常用的放射性同位素有125I和131I。应用于食品安全检测，食品中农药残留、激素等检测。第35页，共53页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光法IF直接法—荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。特异性强，但任一抗原均需制备荧光素抗体间接法—用第一抗体与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。灵敏度高、荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光增多。第36页，共53页，星期日，2025年，2月5日第二节淋巴细胞的测定测定淋巴细胞的功能，可以判断机体的细胞免疫或体液免疫水平。测定淋巴细胞功能试验应用于功能性食品等研究中。第37页，共53页，星期日，2025年，2月5日T淋巴细胞增殖试验T细胞功能测定细胞毒试验第38页，共53页，星期日，2025年，2月5日T淋巴细胞增殖试验T淋巴细胞在有丝分裂原或抗原刺激下可转化为淋巴母细胞，产生一系列形态变化。细胞变大、细胞浆增多、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等。第39页，共53页，星期日，2025年，2月5日T淋巴细胞增殖试验形态学方法--镜检淋巴母细胞3H-TdR掺入法—氚标记胸腺嘧啶核苷（Thymidineribosode)渗入法。测定DNA增殖的量(也可用于测NK细胞活性)MTT比色法—细胞活化增殖水平（可溶性噻唑盐，代谢后产生兰紫色物）T淋巴细胞增殖试验T淋巴细胞增殖试验第40页，共53页，星期日，2025年，2月5日根据形态结构，计算淋巴细胞转化率，即淋巴母细胞的含量形态学方法第41页，共53页，星期日，2025年，2月5日淋巴细胞转化过程中，细胞DNA合成大量增多。在细胞培养液中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），使3H-TdR渗入到DNA中，根据细胞内核素的量可判断淋巴细胞转化程度。3H-TdR掺入法第42页，共53页，星期日，2025年，2月5日MTT比色法MTT是一种黄色可溶性噻唑盐，掺入细胞后，在细胞活化增殖时通过线粒体能量代谢过程，MTT代谢形成蓝紫色甲瓒沉积于细胞内或细胞周围，形成的甲瓒的量与细胞活化增殖的程度成正相关。第43页，共53页，星期日，2025年，2月5日细胞毒试验细胞毒试验乳酸脱氢酶法细胞凋亡检查法第44页，共53页，星期日，2025年，2月5日乳酸脱氢酶法—LDH在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡的数目成正比，用比色法测定。乳酸脱氢酶法第45页，共53页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡检查法—靶细胞被CTL杀伤后，可发生细胞凋亡。方法有形态学法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等。细胞凋亡检查法第46页，共53页，星期日，2025年，2月5日B细胞功能测定B细胞的数目和功能测定是反应机体体液免疫水平的重要指标。第47页，共53页，星期日，2025年，2月5日抗体形成细胞试验用绵羊红细胞（SRBC）免疫家兔或小鼠，取家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与高浓度的SRBC混合后加入琼脂糖凝胶中，其中每个释放溶血性抗体的细胞可致敏其周围的SRBC，在补体参与下，抗体形成细胞周围SRBC溶解，在其周围形成一个肉眼可见的空斑。一个空斑代表一个抗体形成细胞，空斑数量反应机体的体液免疫功能。第48页，共53页，星期日，2025年，2月5日举例第49页，共53页，星期日，2025年，2月5日增强免疫力的功能性食品的