DB15T 4019-2025 马肠道乳酸菌的筛选及鉴定技术规程.docxVIP

ICS65.020.30CCS

ICS

65.020.30

CCS

B41

内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准

DB15/T4019—2025

马肠道乳酸菌的筛选及鉴定技术规程

Codeofpracticeforscreeningandidentificationoflacticacidbacteriainequinegut

2025-04-30发布 2025-05-30实施

内蒙古自治区市场监督管理局 发布

DB15/T4019—2025

DB15/T4019—2025

I

I

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古农牧业科学院、内蒙古草原御驴科技牧业有限公司、内蒙古农业大学、杭锦旗农牧技术推广中心、内蒙古医科大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古自治区农畜产品质量安全中心、乌拉特中旗畜牧和水产服务中心。

本文件主要起草人：苏少锋、吴海青、赵一萍、耿傲盼、李建、张心壮、薄素玲、黄瑶、乔健敏、高天、白晋宇、张勇伟、陈越、孙培陪、史艳英、罗杰、余彪、聂丽珍、王宇胜、乌仁塔娜、贾军、海旭冉、刘永、武玉平、郝治华、徐超、郝海忠、周姵诺、王春浩、马晓彤、赵娜。

DB15/T4019—2025

DB15/T4019—2025

DB15/T4019—2025试剂质量和培养基制备质量标准按照GB4789.28执行。4.3.2 耗材实验中用到的耗材按照附录A中A.3执行。溶液配制按照附录A中A.4执行。

DB15/T4019—2025

试剂质量和培养基制备质量标准按照GB4789.28执行。

4.3.2 耗材

实验中用到的耗材按照附录A中A.3执行。

溶液配制

按照附录A中A.4执行。

PAGE

PAGE1

PAGE

PAGE2

马肠道乳酸菌的筛选及鉴定技术规程

范围

本文件规定了马肠道乳酸菌的筛选及鉴定的材料和技术要求。本文件适用于马肠道乳酸菌的筛选及鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.2 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定

GB4789.28-2024 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB4789.35-2023 食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验

GB7300.502-2023 饲料添加剂第5部分：微生物植物乳杆菌

GB/T38483 微生物源抗生素类次生代谢产物抗细菌活性测定抑菌圈法

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

材料与设备

材料

试验菌株

从马肠道的内容物与黏膜中分离的乳酸菌。

指示菌株

伤寒沙门氏菌（SalmonellatyphimuriumCMCC（B）50071）、大肠埃希氏菌（Escherichiacoli

ATCC25922）、金黄色葡萄球菌（StaphylococcusaureusCMCC（B）26003）。

仪器设备

实验中用到的仪器设备按照附录A中A.1执行。

试剂与耗材

4.3.1 试剂

实验中用到的试剂按照附录A中A.2执行。

乳酸菌的筛选

乳酸菌的分离、纯化

取样部位

马盲肠、结肠或直肠。

分离方法

5.1.2.1 样品制备按照GB4789.35-2023中6.1.4部分执行。

5.1.2.2 稀释按照GB4789.35-2023中6.2.1和6.2.2部分执行。

5.1.2.3 分别吸取200μL10-5g/mL～10-7g/mL稀释液，涂布在MRS琼脂培养基（含有溴甲酚紫）上，

37℃厌氧培养24h～36h，挑取产酸变黄的单菌落进行纯化。

纯化

按照GB4789.35-2023中8.1.1部分执行。

复筛

石蕊牛奶显色

使用96孔板，吸取麦氏浊度为0.5的菌悬液20μL于200μL石蕊牛奶培养基中，37℃厌氧培养24h，挑选使培养基呈粉色凝乳状态的菌株。

工作菌液的制备

吸取麦氏浊度为0.5的菌悬液，以1:10（v:v）加入MRS肉汤培养基中，制备成工作菌液。

产酸性能

吸取工作菌液，37℃厌氧培养，测定0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h和36h的pH

值，选择pH≤4.5的菌株。

生长曲