单克隆抗体制备(共44张课件).pptxVIP

本章内容;概念;为何要使用单克隆抗体？;一个抗原分子上常有许多表位;一个B细胞只会生产一种抗体;抗血清对相似抗原会有交叉反应性;抗血清和单克隆抗体制备;B细胞无法在培养基中生长;肿瘤细胞可在培养基中永久生长;;;杂交瘤技术的基本原理;单克隆抗体制备流程图;亲本细胞的选择与制备;亲本细胞的选择与制备;;;;;细胞融合;;;常见的几种融合形式;细胞DNA合成途经;HAT选择培养基;;核苷酸从头合成途径（denovosynthesis）;筛选方法;;阳性杂交瘤细胞的克隆化;;单克隆抗体的制备流程和应用

最常用的骨髓瘤细胞是NS-1和SP2/0细胞株

传统抗血清对相似抗原会有交叉反应性

一个抗原分子可能含有许多抗原表位

杂交瘤细胞经过筛选、克隆化培养后成为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。

因此在传统抗血清中，都含有许多种不同的抗体，分别针对这些不同的eptope。

但除非抗原来源困难或有其它目的，我们仍采用传统方法，因免疫反应的启动机制非常复杂，生物整体的免疫反应是最可靠的。

单克隆抗体的制备流程和应用

试采血确定有抗体产生后，即可取出脾脏以收集脾脏细胞(大多为B细胞)与骨髓瘤细胞进行细胞融合。

同时又由于免疫动物的个体差异，对抗原的反应也有相当的差异，以致无法准确控制所得到每批抗血清效价的高低

目的：保证杂交瘤细胞不会因污染或过多传代变异丢失染色体而丧失功能。

这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性：既能够分泌特异性的抗体，又能够在体外长期繁殖。

◆是根据细胞内嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成途径设计的用于筛选杂交瘤细胞的特殊培养基。

一个B细胞只会生产一种抗体

有限稀释法：最常用的方法

核苷酸从头合成途径（denovosynthesis）

8-12周龄BALB/c小鼠先以目标抗原(如菌体)免疫，抗原需加佐剂(adjuvant）注入小鼠体内慢慢释出，诱使B细胞成熟增殖并生产抗体。

一个B细胞只会生产一种抗体

单克隆抗体（McAb）：只针对抗原单一表位的B淋巴细胞克隆产生的同源抗体

将阳性孔细胞株稀释，重新平分到96孔细胞培养板中，以计算使得每孔中只含有一个细胞（例如每mL含有100个细胞，若只要取一个细胞??到一个培养孔中，那你应该吸取多少mL？0.;克隆化需至少进行3-5次;这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性：既能够分泌特异性的抗体，又能够在体外长期繁殖。

2)体外增量培养法：把杂交瘤细胞在大型培养槽中培养，收集培养液上清即得抗体，但每mL只得约数mg，浓度较腹水稀约一千倍。

最近有一种细胞培养瓶，可产生如腹水般浓度的上清，但价格极为昂贵(IBSIntegraBioscience:IntegraCelline)。

何谓佐剂？主要的作用机制有哪些？福氏佐剂的组成？

单克隆抗体的制备流程和应用

高度的均一性和可重复性

◆HAT培养基中含有叶酸拮抗剂-氨基蝶呤，故所有细胞DNA合成的主要途径均被阻断，只能通过替代途径合成。

注意乳剂的生产要完全，可取小量滴入水中，震动后应该不会散去。

这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性：既能够分泌特异性的抗体，又能够在体外长期繁殖。

核苷酸从头合成途径（denovosynthesis）

单克隆抗体制备流程图

◆是根据细胞内嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成途径设计的用于筛选杂交瘤细胞的特殊培养基。

PEG可导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。

骨髓瘤细胞(NS-1)

传统抗血清对相似抗原会有交叉反应性

试采血确定有抗体产生后，即可取出脾脏以收集脾脏细胞(大多为B细胞)与骨髓瘤细胞进行细胞融合。

核苷酸补救合成途径（salvagesynthesis）

试采血确定有抗体产生后，即可取出脾脏以收集脾脏细胞(大多为B细胞)与骨髓瘤细胞进行细胞融合。

什么是抗血清？制备的基本流程？单价特异性抗血清？

骨髓瘤细胞(NS-1);单克隆抗体生产;;;;单克隆抗体的性质鉴定;;单克隆抗体的特性;;;思考题