DB34_T2404-2015_猪丹毒杆菌检验规程_安徽省.docxVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2404—2015

猪丹毒杆菌检验规程

Protocolofexaminationforswineerysipelas

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2404—2015

前言

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学、安徽省猪病监测工程技术中心提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽省猪病监测工程技术中心。

本标准主要起草人：李郁、孙裴、李泉生、钱昌银、魏建忠、檀华蓉、张联合。

I

DB34/T2404—2015

猪丹毒杆菌检验规程

1范围

本标准规定了猪丹毒杆菌的检验方法。

本标准适用于猪丹毒杆菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂

NY/T566猪丹毒诊断技术

3设备和材料

3.1显微镜：物镜10倍～100倍。

电子天平：感量0.1g。

3.4冰箱：2℃～5℃。

4

饱和氯化钠溶液：见附录A中A.1。

1

DB34/T2404—2015

4.13硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂：按照GB/T14926.43-2001中的5.7规定。

4.14氧化酶试剂：按照GB/T14926.43-2001中的5.8规定。

4.15胰蛋白胨水：见附录A中A.6。

4.16马尿酸钠培养基：按照GB/T14926.43-2001中的5.18规定。

5检验程序

猪丹毒杆菌检验程序见图1。

检样

显微镜检查

直接涂片

革兰氏染色

镜检

分离培养

动物试验

血液或血清

琼脂平板

马丁肉汤

临症表现

病理变化

染色镜检

分离培养

选取可疑菌

落涂片镜检、

纯培养

生化反应

PCR鉴定

血清型鉴定

6操作步骤

6.1采样、运输和保存

6.1.1急性败血型猪丹毒可采取肾、脾、肝、心血、淋巴结；亚急性疹块型猪丹毒可采取疹块及其周

围皮肤；慢性型猪丹毒可采取肿胀的关节液、心脏瓣膜增生物。

6.1.2脏器组织样品采集后需延迟送检的，可保存于饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液中，保

存时间不超过72h。

2

DB34/T2404—2015

6.2.1采集的样品制成涂片，革兰氏染色，镜检。

6.2.2猪丹毒杆菌形态学特征革兰氏阳性小杆菌，在动物组织中呈断发状小短杆菌体，大小为0.2～

0.4×0.8～2.5μm，无芽孢，无荚膜，无鞭毛，常单独或排列成短链，在慢性病例的动物体内或陈旧培

养基中呈现细长弯曲的长丝状。

6.3分离培养

6.3.1对没有受污染的新鲜病料可直接接种在血液琼脂或血清琼脂培养基上，37℃培养24～48h。或

经马丁肉汤37℃培养24h后，再转种于血液琼脂或血清琼脂培养基上，37℃培养24h。

6.3.2如被检材料已腐败或被污染，可在上述培养基中加入1/100万结晶紫和1/5万叠氮钠，或加入

新霉素（400μg/mL）或万古霉素（70μg/mL），抑制其他杂菌生长。

6.3.3在血清琼脂上菌落特征细小、圆形、透明、凸起、灰白色、有光泽、质软、露珠样、易混悬

于盐水中。

6.3.4在血液琼脂上菌落特征同6.3.3，并形成绿色的狭窄溶血环（α溶血）。

6.3.5在马丁肉汤中生长特征轻度混浊，振动试管呈现出云雾状，有少量灰白色粘稠沉淀，不形成

菌膜和菌环。

6.4生化反应试验

糖发酵反应常不规则，一般可分解葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖，产酸不产气；不分解木糖、麦芽

糖、甘露醇、蔗糖。产生硫化氢，不液化明胶，不使硝酸盐还原为亚硝酸盐，不形成靛基质，甲基红、

V-P、接触酶、氧化酶试验均为阴性。

6.5.1猪丹毒杆菌对小白鼠、大白鼠、家兔、鸽均有致病力，以小白鼠最敏感。

6.5.2将肾、脾、肝、淋巴结和疹块部皮肤磨碎，用灭菌生理盐水制成1:5～1:10组织悬液，或将

24h的肉汤纯培养物做动物试验用。小白鼠皮下注射组织悬液0.2mL或纯培养菌液0.1mL，接种后

小鼠出现精神萎顿、拱背、毛乱、停食，3～7天死亡；死亡的小鼠脾肿大，肺和肝充血，肝有时可见

小点坏死。以死亡小鼠的心血或脏器制成涂片，革兰氏染色，镜检，可见大量猪丹毒杆菌；同时在血液

琼脂或血清琼脂培养基