DB34_T2252-2014_水产品中孔雀石绿残留的检测—胶体金免疫层析法_安徽省.docxVIP

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B50

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2252—2014

水产品中孔雀石绿残留的检测—胶体金免

疫层析法

Detectionofmalachitegreenresidueinaquaticproducts-Colloidalgold

immunochromatographicmethod

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2252—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由合肥市渔政监督管理站提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会、杭州南开日新生物技术有限公

司。

本标准起草人：赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、

陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、洪家春。

I

DB34/T2252—2014

水产品中孔雀石绿残留的检测-胶体金免疫层析法

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范围

本标准规定了水产品中孔雀石绿（MalachiteGreen，MG）及其代谢物隐色孔雀石绿（Leucomalachite

Green，LMG）残留的检测——胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判

断及表述、结果确证的方法。

本标准适用于鱼、甲鱼、龟肌肉组织和虾、蟹去壳、肠腺的可食用组织中孔雀石绿及其代谢物隐色

孔雀石绿残留的快速筛查检测。

本标准方法的检出限为：3.0μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

本法为竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。样品中残留的孔雀

石绿及其代谢物隐色孔雀石绿，以乙酸胺盐溶液和乙腈提取，正己烷净化，经四氯苯醌将隐色孔雀石绿

氧化成孔雀石绿，转入并溶解金标微孔内包被的抗孔雀石绿抗体和胶体金的结合物，再滴加到孔雀石绿

胶体金免疫快速检测试剂板的加样孔中，样品溶液以硝酸纤维素（NC）膜为载体，利用微孔膜的毛细管

作用缓慢向另一端渗移，在移动的过程中，样品溶液中的孔雀石绿与胶体金标记的特异性单克隆抗体结

合，从而抑制了抗体和检测线上特异性结合抗原的结合，未被孔雀石绿结合的抗体与检测线上的抗原反

应，并通过胶体金的颜色而显示出红色条带。用胶体金读卡仪或目测比较板/卡上控制线（C线）和检

测线（T线）上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。当样品中的孔雀石绿或隐色孔雀石绿含量

达到或超过本方法检出限时，检测线较控制线显色淡甚至无显色，判定为阳性。反之，当样品中的孔雀

石绿或隐色孔雀石绿含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定为阴

性。

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除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。

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DB34/T2252—2014

4.7氯化钙（CaCl2）。

4.8

正己烷（C6H14）。

4.9四氯苯醌（C6Cl4O2）：化学纯。

4.10氢氧化钠（NaOH）。

4.11乙酸胺盐溶液：称取对甲苯磺酸5.16g，盐酸羟胺0.1g，乙酸铵0.2g，加水溶解，定容至

500mL，用4mol/L4.10氢氧化钠调pH至4.5。

4.120.1％四氯苯醌溶液：溶解0.1g四氯苯醌（4.9）于80mL水中，加水定容至100mL。

4.13孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂板。

4.13.1孔雀石绿结合抗原：偶联率为1:10～1:20（载体蛋白:MG）。

4.13.2抗孔雀石绿抗体：多抗或单抗。多抗效价应大于5000（间接ELISA法），或有效抗体含量应

大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗效价应大于15000（间接ELISA

法），或有效抗体含量应大于0.5mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。抗体相对亲和

力应大于3.0×109（结合率下降50％时，相对应的抗体浓度的倒数）。

4.13.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。

4.13.4金标微孔：微孔底部包被有抗孔雀石绿抗体和胶体金的结合物。

4.13.5NC膜：4cm毛细管时间121s～149s。

4.13.6吸水垫：滤纸、玻璃纤维或吸水纸。

4.13.7背衬：PV