固定化酶和固定化细胞 (2).pptVIP

4.6.2化学分析和临床诊断方面的应用固定化酶使酶法分析不但显现高度的灵敏性和完全的作用专一性，而且稳定性好，可反复使用，避免由于酶制剂引入的杂质4.6.3医学方面的应用将酶制成微小的胶囊型固定化酶再注入人体，可以增加稳定性，且避免与体液接触而产生抗体第55页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.6.4亲和色谱上的应用固定化酶用于亲和层析，可专一性的分离纯化酶的底物、辅酶、抑制剂和抗体等。4.6.5环境保护方面的应用一是环境监测；二是污染物处理4.6.6能源开发方面的应用（1）产生氢气和甲烷（2）固定化微生物电池第56页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.6.7基础理论研究方面的应用（1）酶反应机制的研究（2）酶亚单位结构的研究（3）蛋白质、核酸等高分子物质结构的研究（4）揭示酶原激活机理（5）作为膜结合酶的模型（6）生物功能研究第57页，共60页，星期日，2025年，2月5日内容回顾4.1酶固定化技术发展史4.2固定化酶的定义4.3固定化酶的制备方法4.4固定化酶的特性4.5固定化细胞4.6固定化酶与固定化细胞的应用第58页，共60页，星期日，2025年，2月5日课后思考1.固定化酶的定义及优点？2.酶的固定化方法有哪些？各有什么优缺点？3.酶固定化后，酶活力降低的原因?4.固定化酶的稳定性增强主要表现在哪些方面？第59页，共60页，星期日，2025年，2月5日感谢大家观看第60页，共60页，星期日，2025年，2月5日************************************************（4）烷化法和芳基化法以卤素为功能团的载体可与酶蛋白分子上的氨基、巯基、酚基等发生烷基化或芳基化反应而使酶固定化。载体：卤素为功能团，如卤乙酰、三嗪基或卤异丁烯基的衍生物。第23页，共60页，星期日，2025年，2月5日优点：酶和载体之间的结合相当牢固，酶稳定性好、可连续使用较长时间。缺点：载体活化的难度较大，操作复杂，反应条件较剧烈，制备过程中酶直接参与化学反应，易引起酶蛋白空间构象变化。共价键结合法优缺点第24页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.3.3包埋法（entrapment）定义：将酶包埋在高聚物的细微凝胶网格中或高分子半透膜内的固定化方法。前者又称为凝胶包埋法，酶被包埋成网格型；后者又称为微胶囊包埋法，酶被包埋成微胶囊型。第25页，共60页，星期日，2025年，2月5日（1）凝胶包埋法载体：天然凝胶：海藻酸钠凝胶、明胶、琼脂凝胶、卡拉胶等合成凝胶或树脂：聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和光交联树脂等。（2）微胶囊包埋法微胶囊材料：聚酰胺、火棉胶、醋酸纤维素第26页，共60页，星期日，2025年，2月5日第27页，共60页，星期日，2025年，2月5日优点：方法简单；防止酶渗出；酶回收率高。缺点：只适用于小分子底物和产物的酶；高聚物网格或半透性膜对小分子物质扩散的阻力可能导致固定化酶的动力学行为改变和活力的降低。包埋法优缺点第28页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.3.4交联法（cross-linking）定义：使用双功能或多功能试剂使酶分子之间相互交联呈网状结构的固定化方法。酶蛋白的功能团：氨基、酚基、巯基和咪唑基双功能试剂：戊二醛、己二胺、异氰酸衍生物、双偶氮联苯和N,N′-乙烯双顺丁烯二酰亚胺等第29页，共60页，星期日，2025年，2月5日交联法优缺点优点：结合牢固、稳定性好缺点：酶活力损失大，交联剂价格昂贵第30页，共60页，星期日，2025年，2月5日第31页，共60页，星期日，2025年，2月5日第32页，共60页，星期日，2025年，2月5日固定化酶不同方法的比较第33页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.4固定化酶的特性4.4.1固定化酶的形状颗粒和线条主要用于工业发酵生产；薄膜主要用于酶电极，应用于分析化学；酶管机械强度较大，宜用于工业生产。第34页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.4.2固定化酶的性质固定化酶分子状态从游离的状态变为牢固地结合于载体的状态，其结果往往引起酶的性质的改变。第35页，共60页，星期日，2025年，2月5日