猪肉中廋肉精的SPE-UPLC-MS测定实验.pdfVIP

猪肉中廋肉精的SPE-LC-MS测定

一、实验目的

1.学习液相色谱-质谱联用仪的基本原理及基本操作；

2.学习复杂样品的固相萃取前处理方法；

3.学习质谱仪的定性分析方法。

二、实验原理

β-受体激动剂（俗称“瘦肉精”）添加到饲料中，能有效地促进畜禽蛋白质合

成和肌肉组织生长，提高瘦肉率和饲料转化率，在畜禽养殖中具有可观的经济效

益。由于利益的驱使，在畜牧养殖环节出现了以克伦特罗为代表的瘦肉精的滥用，

导致其在动物体内蓄积残留，消费者购买带有药物残留的畜禽产品就会引起急性

中毒。近年来，国内外发生了多起由于食用了瘦肉精饲喂的动物产品而导致中毒

的事件，中毒事件的不断发生使得各国相继出台禁令。因此，建立净化效果好、

灵敏度高、选择性强的能够准确分析动物产品中瘦肉精残留的方法，具有重要意

义。

经过溶剂提取后的猪肉样品，首先经过固相萃取（SPE）方法进行净化富集。

完整的固相萃取流程包括四个步骤：固相萃取柱预平衡、上样、柱淋洗和样品洗

脱过程，如图1所示。

图1固相萃取过程示意图

以最常见的反相保留机制为例：首先，分别用强洗脱溶剂（如甲醇）和弱洗

脱溶剂（如水）交替润湿固相萃取柱，以便活化填料和去除柱中空气；第二步是

上样步骤，选择弱洗脱溶剂溶解样品并装载于柱子上，通过泵的作用将样品渗透

到吸附剂中；第三步是淋洗步骤，一般选择洗脱强度较弱的溶剂尽可能洗去基质

成分，同时目标分析物还保留在吸附剂上；最后是洗脱步骤，选择适当洗脱强度

的溶剂把目标物洗脱下来，洗脱液经过氮气吹干后，复溶，待分析。

预处理后的样品溶液，采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）方法进行定性分

析。本实验使用的是四极杆-飞行时间质谱仪（Q-TOF-MS），配有电喷雾（ESI）

离子源，经液相色谱分离后的试液依次进入源内进行电离。电喷雾源的基本原理

是：带高电压的半圆形电极环绕在喷雾针外，使得含被测物离子的流动相在雾化

针顶端发生雾化；由于半圆形电极和毛细管间的电压不同，产生一个电场，喷雾

液滴在电场的作用下，飞向毛细管；加热的氮气干燥气反向流动，带走液滴中的

中性溶剂分子，从而收缩液滴，直到排斥的静电力超过液滴表面张力，引起库仑

爆炸；这个过程不断重复，直到被测物离子最终变成气态进入毛细管（见图2）。

图2电喷雾电离源的基本工作原理

质谱仪由四极杆和飞行时间质量分析器串联而成。其中，四极杆具有过滤离

子功能，可以通过调节直流电压和射频交流电压，就可选择不同质荷比（m/z）

的离子通过四极杆。而在飞行时间质量分析器中，施加给不同离子的电势能是相

同的，电势能在离子飞行过程中被转化成动能，离子质量越大，飞行速度就越慢，

通过精确测量其飞行时间，就可以计算出不同离子的质荷比，进而得到被测物的

精确质量数。因此，在四极杆-飞行时间质谱仪中有两种工作模式：一种是全扫

描（Full-scan）模式，即四极杆功能关闭，所有离子全部进入飞行时间质量分析

器进行分析；另一种是目标离子二级碎裂（Target-MS/MS）模式，即四极杆选择

特定离子通过，进入碰撞室被碰撞气打碎，其碎片离子进入飞行时间质量分析器

进行分析。

在本实验中，样品溶液首先采用全扫描模式进行分析，得到瘦肉精类化合物

的精确分子式。随后，采用目标离子二级碎裂模式进行分析，通过解析目标化合

物的二级碎片推断出这些物质的结构。

三、实验仪器和试剂

LC-MS仪配自动进样器（Agilent1290HPLC和6530Q-TOF-MS），色谱柱

采用AgilentC18反相柱（4.6×150cm,5µm）。流动相A0.1％甲酸水溶液，流动

相B纯甲醇，梯度洗脱。匀浆机，离心机，15ml玻璃离心试管，1.5mL和10mL

PV管，固相萃取装置，C18固相萃取小柱，氮吹仪，玻璃样品小瓶。

猪肉样品。甲醇，甲酸，乙酸，正己烷，乙