叶绿体色素含量的测定.ppt

关于叶绿体色素含量的测定第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日实验目的

叶片的叶绿素含量直接影响着光合速率，并与氮素营养有密切的关系，在栽培、生理、农化、育种等研究上是重要的诊断指标，常需测定和控制叶绿素含量。

掌握使用分光光度计定量测定叶绿素含量第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日叶绿素含量测定方法叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯-比尔定律计算出提取液中各色素的含量第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日实验原理1

根据朗伯-比尔定律当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。

即：A=K*L*CK：比吸收系数L：液层厚度C：溶质浓度(克/L)第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日比吸收系数(?)的物理意义Lambert-Beer定律中的比例系数“K”的物理意义是：吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸光度第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日比吸收系数(?)的性质①κ与溶液的浓度和液层厚度无关，与吸光物质的特性及光的波长等有关，也受温度和溶剂的影响。②对于同一波长下，当其他条件一定时(温度、溶剂等)，κ的大小取决于物质的性质。③对于同一物质，当其他条件一定时(温度、溶剂等)，κ的大小取决于波长。 ∴κ能表示物质对某一波长的光的吸收能力。κ越大，表明物质对某波长的光吸收能力越强。第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日实验原理2吸光度的加和性

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和

即：A=A1+A2+……+An第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日叶绿体色素提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素;只需测定该溶液在三个特定波长下的吸光度;根据这三个色素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日红光区蓝紫光区645nm663nm叶绿素a:663nm处最大吸收峰；叶绿素b:645nm处最大吸收峰；且两吸收曲线相交于652nm处第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日类胡萝卜素→吸收兰紫光，不吸收红光等长波长的光叶绿素→吸收红光、兰紫光在测定叶绿素a、叶绿素b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日叶绿素a和叶绿素b的80%丙酮溶液，当浓度在1g/L时，比吸收系数k值:波长（nm）K值叶绿素a叶绿素b66382.049.2764516.7545.60645nm663nm第11页，共31页，星期日，2025年，2月5日据此可列出下列方程式：A663、A645分别为叶绿素溶液在波长663、645nm处的光密度;Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度(单位:克/升)A663=A叶绿素a+A叶绿素bA663=KaLCa+KbLCbA663=82.04Ca+9.27Cb……………(1)A645=16.75Ca+45.6Cb……………(2)第12页，共31页，星期日，2025年，2月5日将上式整理，可以得到下式：Ca(g/L)=0.0127A663-0.00269A645（3）Cb(g/L)=0.0229A645-0.00468A663（4）将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为：Ca(mg/L)=12.7A663-2.69A645（5）Cb(mg/L)=22.9A645-4.68A663（6）－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645（7）CT为叶绿素的总浓度第13页，共31页，星期日，2025年，2月5日红光区蓝紫光区645nm663nm470nm第14页，共31页，星期日，2025年，2月5日类胡萝卜素含量的测定在叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测定溶液中的类胡萝卜素含量在80％丙酮提取液中三种色素含量的计算公式(单位：mg/L)：C类胡萝卜素=(1000A470–