实验大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.ppt

关于实验大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日内容一：大肠杆菌感受态细胞的制备实验目的实验原理实验仪器、材料、试剂实验步骤1234注意事项思考题56第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日实验目的掌握感受态细胞的概念及其意义。掌握感受态细胞的制备原理与操作方法。第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日实验原理感受态：受体（或者宿主）最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。制备感受态的细胞一般选择对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。常用的感受态制备方法包括KCl、CaCl2等方法；后者因为操作简便且符合大多数的分子克隆要求，因而被广泛采用。第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日CaCl2法的基本原理：细菌处于低温（0℃）和低渗的CaCl2溶液中，菌体膨胀，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于菌体表面，在42℃进行短时间的热激处理，促进DNA的吸收。实验原理第5页，共28页，星期日，2025年，2月