3.2 基因工程的基本操作程序 课件 高中生物人教版（2025）选择性必修3(共56张PPT).pptxVIP

1997年，我国政府首次批准商

业化种植转基因抗虫棉。到2015年，

我国已育成转基因抗虫棉新品种100

多个，减少农药用量40万吨，增收

节支社会经济效益450亿元。;

.表达Bt基因

Bt基因重组DNA分子抗虫棉4.目的基因

的;

第3章基因工程

第2节基因工程的基本操作程序;

本节主要解决的困惑

1.利用PCR获取和扩增目的基因

2.基因表达载体的构建过程;;;

需要细胞提供能量

需要解旋酶的作用

结果：氢键断裂，双链打开

游离的脱氧核苷酸

5

DNA解旋酶;;

1转录时，DNA链完全解开吗?整个DNA都转录边解旋边转录

?

转录不是转录整个DNA,是转录其中要表达的基因，以基因的一条链为模板，

2不同基因的模版链是否相同?;

深度思考

【思考1】:如果把一个真核生物的基因导入原核细胞中表达，一定会产生原来的蛋白质吗?;

深度思考

【思考2】:如果把真核基因导入原核细胞中表达，不考虑蛋白质加工的问题，如何产生与原来结构相同的蛋白质?

内含子外显子内含子外显子;

与生物抗逆性相关的基因(Bt抗虫基因)

与优良品质相关的基因

与生物药物和保健品相关的基因(胰岛素、干扰素基因)

与毒物降解相关的基因

与工业用酶相关的基因等

(一)从基因文库中获取；

3.目的基因获取方法：(二)通过DNA合成仪直接合成；

(三)利用PCR技术扩增；

寰;

(一)从基因文库中获取目的基因(未知序列)

1.基因文库概念：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。

2.基因文库类型：基因组文库(包含一种生物的所有基因)

部分基因文库(包含一种生物的一部分基因)(cDNA文库);

(二)人工合成目的基因(已知序列)

1.前提：基因比较小、核苷酸序列已知

2.方法：通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因;

DNA复制所需的基本条件;

思考以下问题，小组合作交流，派代表展示成果，时间3min。

(1)什么是引物?DNA复制时为什么需要引物?

是指两段与待扩增的DNA序列互补的一小段DNA或RNA。

在DNA扩增??，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从引物的3′端延伸

(1)设计一对与目的基因两侧的部分脱氧核苷酸序列互补配对的引物(保证以DNA的两条链为模板进行扩增):

①为方便构建重组质粒，需在引物5端添加适当的限制酶的识别序列/酶切位点；

②为保证目的基因与载体正向连接，常在两种引物上设计不同的酶切位点；

③为避免引物自身折叠，设计引物时需避免引物之内部形成碱基互补配对。

④为避免引物自连，设计引物时需避免引物之间形成局部碱基互补配对。

PCR过程中，DNA双链解开是在高温下完成的，不需要解旋酶；由于PCR

过程温度较高，所以需要能耐高温的DNA聚合酶。;

4.利用PCR获取和扩增目的基因过程

385°℃a变性(90℃-95℃):双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，

形成单链DNA

b.复性(复性55℃-60℃):系统温度降低，引物与DNA模板结合

形成局部双链

50℃(5)复性温度与设计的引物(长度、碱基组成)有关：

①长度相同但G—C含量高的引物需要设定的复性温度较

高;②若复性温度过高，则会破坏引物与模板的结合，可能导致PCR反应得不到任何扩增产物。;

比较项目;

5

72℃左右，新DNA合成

3

5

5’

5;

5

5

高温变性、低温复性;

第一次循环;

中温延伸;

DNA变性

再与引物复性合成DNA

etc.

ete.

etc.

etc.

etc,

etc.

etc.

etc.;

复制次数;

例16利用PCR将某小段含目的基因的DNA分子扩增循环

n次，则B

A.需要已知目的基因的全部序列以便设计引物

B.共需2+1-2个引物参与子代DNA分子的合成

C.应向反应体系中加入解旋酶、DNA聚合酶、缓冲液等

D.理论上第4轮循环产物中含两种引物的DNA片段占15/16解析?只需要已知目的基因两端的序列便可设计引物，A错误；扩增循环n次，需一种引物的数量为2”-1,常规PCR共需两种引物的数量为2×(2”-1)=2+1-2