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第2节基因工程的基本操作程序
第四步目的基因的检测与鉴定;问题1：将基因表达载体导入受体细胞后，如何判断是否导入成功？;mRNA;;探针;1;2;;;转基因生物;①检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因;1.目的基因的筛选和获取-前提
利用PCR获取和扩增
人工合成
DNA文库
2.构建基因表达载体-核心
目的基因、启动子、终止子、标记基因等
3.将目的基因导入受体细胞-关键
农杆菌转化法(植物)、显微注射法(动物)、
感受态细胞（如加Ca2+）转化法(微生物);
4.目的基因的检测与鉴定-保证
分子检测：是否插入、转录、翻译
个体水平：是否具有抗性以及抗性强度等。;1.研究人员将两个抗虫基因(T)导入棉花细胞内培育转基因抗虫棉。那么两个抗虫基因在染色体上随机整合有几种情况？;问题1：为什么不直接在构建基因表达载体的时候给目的基因添加放射性同位素或荧光蛋白标记来检测目的基因是否导入受体细胞？;问题2：基因工程中，检测是否翻译出相应的蛋白质的抗原—抗体杂交法中，为什么要使用二抗？;1.研究人员将一种海鱼的抗冻蛋白基因afp整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染番茄细胞，获得了抗冻的番茄品种。判断下列相关表述是否正确。
（1）afp基因是培育抗冻番茄用到的目的基因。（）
（2）构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶和核酸酶（）
（3）只要检测出番茄细胞中含有afp基因，就代表抗冻番茄培育成功（）;2.利用PCR既可以快速扩增特定基因，也可以检测基因的表达。下列有关PCR的叙述错误的是（）
A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温酶
B.变性过程中双链DNA的解开不需要解旋酶
C.复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则
D.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和4种核糖核苷酸;二、拓展应用
1.研究人员在研究转基因烟草中外源卡那霉素抗性基因的遗传稳定性时，发现44株转基因烟草中有4株该基因的遗传不符合孟德尔遗传规律，在它们的自交后代中出现了较多的没有卡那霉素抗性的植株。请查找相关资料，尝试对这个问题作出解释。;2.八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtl??示）参与β-胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtl基因转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素，由此生产出的大米称为“黄金大米”。请根据以上信息回答下列问题。;（2）在构建质粒载体时，目的基因序列中能否含有用到的限制酶的识别序列？为什么？;（3）请查找相关资料，了解科学家为什么要培育“黄金大米”以及当前关于“是否要推广黄金大米’”的各种争论。你还可以提出自己的看法，并与同学交流讨论。
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