DNA重组技术课件.pdf

重组DNA技术

11.1重组DNA技术是基因工程的核心技术

11.2获得需要的目的基因（外源基因）

11.3构建重组质粒和基因克隆

11.4转化受体细胞和转化子的筛选

11.5转化子的分析——Southern杂交

11.1重组DNA技术是基因工程的核心技术

重组DNA技术，又称为基因克隆或分子克隆技

术，

＞克隆(clone)—-无性繁殖

A分子克隆-DNA的无性繁殖技术

＞重组DNA技术包括了一系列的分子生物学操

作步骤。

＞重组DNA技术的重大突破带动了现代生物技

术的兴起，并很快产生了许多生命科学的高

技术产业。

基因工程(geneticengineering)

A所谓基因工程(geneticengineering)就是把

外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使

这个基因能在受体细胞内复制，转录，翻译表

达的操作叫基因工程。

A基因工程可使另一种生物获得新的遗传性状或

表达所需要的产物。

＞重组DNA操作一般步骤：

（1）获得目的基因；

（2）与克隆载体连接，形

成新的重组DNA分子；

（3）用重组DNA分子转化

受体细胞，并能在受体

细胞中复制和遗传；

（4）对转化子筛选和鉴定;

（5）对获得外源基因的细

胞或生物体通过培养，

获得所需的遗传性状或

表达出所需要的产物。

11.2获得需要的目的基因(外源基因)

＞获得需要的目的基因常用的方法：

(1)直接从生物体中提取总DNA,构建基因组DNA文库

(genomicDNAlibrary),从中调用目的基因；

(2)以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段，建立

cDNA文库；

(3)利用聚合酶链式反应(PCR)特异性地扩增所需要

的目的基因片段，等等。

(4)化学合成

细胞内总DNA的提取分离与基因组文库的构建

•细胞内总DNA的提取分离程序

苯酚沉淀蛋白质

紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。

DNA的浓度(mg/L)二A26OX50注:比色杯光径1

DNA的纯度=Awra/A2M21.8

•基因组DNA文库的构建

将总DNA经过酶解，经蔗糖梯度离心或琼脂糖凝胶

电泳分离不同长短的DNA片段。包含的基因组片段

分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体

外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因组

文库。

cDNA文库的构建

mRNA3,

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mRNA

5

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