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消毒试验要求一
培养基
选择相应培养基和试剂进行菌种的传代和培养，消毒试验所需培养基和试剂。实验室自行制备的固体斜面培养基和平板冷藏保存，保存期不超过3个月，如出现缺水、干裂等情况，灭菌处理后销毁。实验室自行制备的液体培养基密封冷藏保存，保存期不超过3个月，如出现浑浊，灭菌处理后销毁。
商品化平板、斜面和培养基按产品说明书储存并在有效期内使用。
复苏与传代
1以无菌操作方式开启冻干菌种管，加入适量培养液（按菌种选择培养液，如细菌选择营养肉汤、白色念珠菌选择沙堡液体培养基、分枝杆菌选择苏通综合液体培养基、黑曲霉菌选择麦芽浸膏营养肉汤培养基），吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mL～10.0mL相应培养液的试管，滴入少许菌种悬液，在适宜温度下培养至规定时间（一般为36℃±1℃培养18h～24h、黑曲霉菌为30℃±1℃培养42h～48h），此为第1代培养物。
2用接种环取第1代培养物，或从菌种冻存管中取适量菌液/瓷珠，划线接种于相应培养基平板（按菌种选择培养基，如细菌选择营养琼脂培养基、白色念珠菌选择沙堡琼脂培养基、分枝杆菌选择改良罗氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基、黑曲霉菌选择麦芽浸膏琼脂培养基），在适宜温度下培养至规定时间（一般为36℃±1℃培养18h～24h、分枝杆菌36℃±1℃培养72h、黑曲霉菌30℃±1℃培养42h～48h），此为第2代培养物。
3挑取第2代培养物中典型菌落，接种于相应培养基斜面或平板（按菌种选择培养基斜面，如细菌选择营养琼脂斜面、白色念珠菌选择沙堡琼脂斜面、分枝杆菌选择改良罗氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂斜面、黑曲霉菌选择麦芽浸膏琼脂培养基平板），在适宜温度下培养至规定时间（一般为36℃±1℃培养18h～24h、分枝杆菌36℃±1℃培养72h、黑曲霉菌30℃±1℃培养42h～48h），此为第3代培养物。
4取第3代培养物，接种于相应培养基斜面，在适宜温度下培养至规定时间，此为第4代培养物。
5按上述方法培养至所需代数，传代时在试管上注明菌种名称、菌种号、代数及传代日期等基本信息。
保存
1菌种斜面的保存
传代用菌种采用斜面冷藏保存。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，在适宜温度下培养至规定时间，生长充分后，转移至冰箱冷藏保存，以备实验传代用。此法用于实验用菌种的短期保存，随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常，灭菌处理后销毁。保存时间与菌种类型有关，一般存储时间不超过9周，铜绿假单胞菌和分枝杆菌不超过6周，如保存期内，斜面出现缺水、干裂等情况，灭菌处理后销毁。
2菌种冻存管的保存
菌种可采用甘油、液体石蜡、瓷珠等方式冻存，根据其特性选择适宜冻存方法，冻存管注明菌种名称、菌种号、冻存日期等基本信息。菌种冻存管在-80℃保存不宜超过18个月。可间隔一段时间，将菌种冻存管复苏后，重新冻存。
3真空冷冻干燥保存
采用真空冷冻技术，将菌种冷冻干燥成菌粉后长期保存。菌种管注明菌种名称、菌种号、日期等基本信息，-20℃±2℃冷冻保藏。
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