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第3期(总第825期)科学咨询管理科学

双光子显微成像系统的应用及开放管理模式探索

冯婉倩

（温州医科大学科研实验中心，浙江温州325035）

摘要：双光子显微镜（Two-photonlaserscanningmicroscope，TPLSM）能够在组织和活体实验动物上实

现超快速深层多色同步荧光成像及同步红外空间高精度光刺激，可用于生物分子、细胞器或离子等生物物质的定

性、定量、定时和定位分布检测，具有配件昂贵、操作复杂、维护难度大的特点。随着各高校科研平台开放共享范

围的扩大，大型仪器已经成为科研工作的基础和保障。本文以超快速双光子活体成像系统为例，通过分析仪器的

结构与功能、技术要求以及维护监管，为高效使用平台贵重仪器和创新科学管理模式提供了思路。

关键词：双光子显微镜；技术应用；开放管理

传统的单光子显微成像技术利用400~700nm的可期已建立较为完善的科研体系。近年来，科研实验中

见光进行Z轴向激发，激光照射在标本上，染料分子吸心大型仪器平台的建立与运行为学校和附属医院的科

收单个光子发射出荧光。在此基础上，激光共聚焦系统研发展、疾病防治和精准治疗提供了支持。目前，平台

通过引入共轭小孔，在一定程度上去除了非焦平面的杂配置了一台OLYMPUS正置双光子显微镜（FVMPE-

散光，提高了成像分辨率，但在成像深度方面仍有很大RS），配备了两台光谱物理红外飞秒脉冲激光器，型

的限制。通常，我们利用共聚焦技术观察的普通标本厚号分别为InsightX3和MaiTaiDeepsee，波长分别在

度不超过200μm，透明化标本的厚度不超过500μm。680~1300nm和690~1040nm可调，具备双光子激发、

相比之下，多光子显微成像技术通过点激发荧光显著提同步双扫、四轴校准、三维拼接四大重要技术。该仪器

高了成像深度，使得观察活体标本的深度可达800μm，自装机以来，使用率高，总使用次数达1600余次，服务

透明化标本厚度最大可达8mm。同时，该技术具有天然时长超过2100小时，用户主要分布在药学院分析测试

的切片效果，且空间分辨率几乎没有损失，其XY轴分中心、眼视光医院、基础医学院、第一和第二临床医学

辨率可达200nm，Z轴分辨率最大为500nm。因此，多光院、公共卫生与管理学院等机构，涵盖了药学/药理学

子显微镜在大小鼠、兔、斑马鱼、果蝇等模式动物活体（神经药理学）、药物分析、药剂学、生物材料与再生

XYZT多序列成像方面具有显著的应用优势，已成为研医学、光控视觉发育和脑功能的分子机制、急性肺损

究胚胎、不同组织和器官中各种类型细胞的形态与功能伤的炎症消退机制等多个研究方向，满足了校内外众

的有用工具。尽管多光子显微镜的光损伤小，但其热毒多课题组在基础研究方面的需求。

性较高，相较于共聚焦技术的成熟稳定，还需进一步摸一、双光子显微镜发展概况

[1]

索条件。活体样本通过转基因、病毒标记、免疫荧光标20世纪90年代，Denk等人发明了第一台双光子

记、小分子探针标记、血管注射染料等方法进行标记，显微镜，并首次应用于生物样本。此后，双光子技术

操作复杂，需手术暴露成像部位，成像效果在很大程度在生物医学研究中的应用取得了爆炸性的增长。双光

上依赖于实验技能水平。本文通过总结多光子显微镜子显微成像基于多光子吸收理论，即荧光基团在同时

的配置参数、成像特点、工作原理及在不同应用中的操吸收两个光子的能量后被激发，当受激电子回到基态

作特点，能够更好地服务于教学和科研。时，大部分能量以荧光形式发射的过程。在这个过程

温州医科大学已建成国家级工程中心、省部共建中，红外飞秒脉冲激光器提供了高强度、非线性、长波

国家重点实验室以及省部级重点实验室等多个重点研长（＞700nm）的近红外激光，使得激发的发射光被高

究平台。学校现有的医学遗传学重点实验