T_TPPA 0001-2022 RBL-2H3肥大细胞脱颗粒法评价中药注射剂类过敏反应操作规程.docxVIP

ICS11.120.01CCSC27

团体标准

T/TPPA0001-2022

RBL-2H3肥大细胞脱颗粒法

评价中药注射剂类过敏反应操作规程

Operatingprocedureforevaluatingtheanaphylactoidreactionsof

traditionalChinesemedicineinjectionbyRBL-2H3mastcell

degranulationmethod

2022-12-22发布2022-12-22实施

天津市医药行业协会发布

T/TPPA0001-2022

目次

前言 I

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4检测原理 1

5材料与设备 2

5.1材料 2

5.2设备 2

6实验方法 2

6.1溶液配制 2

6.2实验步骤 3

7数据处理及判定 5

T/TPPA0001-2022

I

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由天津天士力之骄药业有限公司提出。

本文件由天津市医药行业协会归口。

本文件起草单位：天津天士力之骄药业有限公司、天津大学、天津市药品检验研究院、天津市中药注射剂安全性评价企业重点实验室、创新中药关键技术国家重点实验室、现代中医药海河实验室、河南天地药业股份有限公司、天津红日药业股份有限公司。

本文件主要起草人：鞠爱春、华晓东、李德坤、岳洪水、周水平、张俊华、周立华、万梅绪、庄朋伟、张燕欣、王冲、徐琳、李智、何毅、白晓丽、马晓慧、王蕴华、吕欣、黄芝娟、江昕、张松梅。

T/TPPA0001-2022

1

RBL-2H3肥大细胞脱颗粒法评价中药注射剂类过敏反应操作规程

1范围

本文件规定了RBL-2H3肥大细胞脱颗粒的实验方法。

本文件适用于中药注射剂通过RBL-2H3肥大细胞脱颗粒法对类过敏反应的评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

组胺histamine

组胺是一种有机含氮化合物，由组氨酸在脱羧酶的作用下产生。许多组织，特别是皮肤、肺和肠黏膜的肥大细胞中含有大量的组胺。当组织受到损伤或发生炎症和过敏或类过敏反应时，都可释放组胺。组胺有强烈的刺激血管作用，并能使毛细血管和微静脉的管壁通透性增加，血浆漏入组织，导致局部组织水肿。

3.2

β-氨基己糖苷酶β-hexosaminidase

β-氨基己糖苷酶是一种生物活性因子。肥大细胞受到外源刺激时，迅速释放到组织内引起血管通透性增加。常被作为检测过敏反应的标志物。

4检测原理

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2

肥大细胞是类过敏反应的靶细胞之一，在类过敏反应中，细胞受到外源刺激，出现脱颗粒现象，释放多种生物活性因子，如组胺、β-氨基己糖苷酶等，因此肥大细胞脱颗粒百分率、组胺释放率及β-氨基己糖苷酶释放率为类过敏反应的重要检测指标。

5材料与设备

5.1材料

5.1.1细胞

RBL-2H3细胞。

5.1.2试剂试药

a）氢氧化钠、氯化钠、十二水磷酸氢二钠、十二水磷酸二氢钠、碳酸氢钠、邻苯二甲醛、甲醇、盐酸，上述试剂均为分析纯。

b）C48/80、中性红、胰酶、聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100）、DMEM培养基、胎牛血清、PBS缓冲液、青-链霉素、CCK-8检测试剂盒、β-氨基己糖苷酶检测试剂盒。

c）水为GB/T6682规定的三级水。

5.2设备

酶标分析仪、微孔板振荡培养箱。

6实验方法

6.1溶液配制

6.1.1DMEM完全培养基的配制

将DMEM培养基、胎牛血清和青-链霉素按照89:10:1的体积比混合均匀，即得DMEM完全培养基，4℃保存备用。

6.1.22mg/mLC48/80溶液的配制

称取C48/80加水配制成2mg/mLC48/80溶液。

6.1.31%中性红染液的