基因工程制药 (6).pptVIP

（二）影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素⑴外源基因的剂量外源基因拷贝到高拷贝数的表达质粒上，总体表达水平提高⑵外源基因的表达效率与启动子强弱，核糖体结合位点的有效性，SD序列与起始密码的间距，密码子的组成等都影响其表达效率第30页，共52页，星期日，2025年，2月5日⑶表达产物的稳定性⑷细胞代谢负荷宿主细胞的生长与重组质粒的复制分开细胞的生长和外源基因的表达分成两个阶段⑸工程菌的培养条件优化工程菌培养条件，提高基因表达水平第31页，共52页，星期日，2025年，2月5日（三）真核基因在大肠杆菌中的表达形式⑴以融合蛋白的形式表达药物基因以原核多肽和真核蛋白结合在一起称融合蛋白。优点：操作简便，表达蛋白在菌体内稳定，易实现高效表达；缺点：只能作抗原用。第32页，共52页，星期日，2025年，2月5日⑵以非融合蛋白的形式表达药物基因非融合蛋白指在大肠杆菌中表达的蛋白质以真核蛋白的mRNA的AUG为起始，在其氨基端不含细菌多肽序列。优点：保持原有蛋白活性；缺点：易被蛋白酶破坏。第33页，共52页，星期日，2025年，2月5日⑶分泌型表达蛋白药物基因优点：在周质中稳定，有活性，不含蛋氨酸残基；缺点：产量不高，信号肽不被切割。第34页，共52页，星期日，2025年，2月5日