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常用的血浆蛋白分离纯化技术1、低温乙醇沉淀法分离血浆蛋白（1）原理在介电常数大的溶液中，蛋白质的溶解度大，在介电常数小的溶液中蛋白质的溶解度就小。乙醇能显著地降低蛋白质水溶液的介电常数，从而使蛋白质从溶液中沉淀析出。蛋白质分子量越大，越先析出；蛋白质分子量越小，越后析出第55页，共91页，星期日，2025年，2月5日第56页，共91页，星期日，2025年，2月5日乙醇为有机溶剂的优点化学性质稳定，毒性低可与水任意混合，使用方便易得，易回收，污染小冰点低，在生产条件下不产生具有爆炸性危险的气体混合物抑制细菌生长，对病毒有较强的杀灭作用对蛋白活性影响小第57页，共91页，星期日，2025年，2月5日1.pH2.乙醇浓度3.温度4.蛋白质浓度5.离子强度在五变系统中，对蛋白分离最重要的变化因素是pH和乙醇浓度。（2）低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素第58页，共91页，星期日，2025年，2月5日A、pH当pH位于等电点时，蛋白质的溶解度最小，所以最易沉淀以根据蛋白质的等电点不同顺序沉淀出不同的血浆蛋白。通常低温乙醇法是在pH4.4-7.4之间进行分离.第59页，共91页，星期日，2025年，2月5日B、温度温度低，蛋白质的溶解度低。溶液中加入乙醇，因乙醇的水合作用，会产生放热现象，而温度升高可能造成蛋白质的变性，所以在低温乙醇工艺中，整个过程均应控制在0～-8℃。如温度控制不当，轻则会影响蛋白质的得率，重则引起蛋白质变性。第60页，共91页，星期日，2025年，2月5日C、蛋白质浓度如果溶液的蛋白质浓度较大，容易引起多种蛋白共同沉淀，所以在分离过程中，可将蛋白质溶液作适当的稀释，以减少蛋白质之间的相互作用，避免多种蛋白共同沉淀，但过分稀释，蛋白质易变性，同时增大分离的容量，也不可取。所以应选择适宜的浓度。在低温乙醇工艺中，蛋白质浓度范围为：0.2-6.6%第61页，共91页，星期日，2025年，2月5日D、离子强度盐类与蛋白质的互相影响随离子强度而变化。在低盐溶液中，盐浓度的很小改变即可引起蛋白质溶解度的极大变化。离子强度用r/2表示。低温乙醇法工艺中离子强度的变化范围在0.01-0.16。正常人血清的离子强度接近于0.15。第62页，共91页，星期日，2025年，2月5日E、乙醇浓度乙醇能降低蛋白质溶液的介电常数，随着乙醇浓度的增加，蛋白质溶液的介电常数逐渐降低，而其溶解度急剧下降。在低温乙醇工艺中，乙醇的浓度范围在0-40%。第63页，共91页，星期日，2025年，2月5日低温乙醇法优点相对简单的操作，产量高，适宜工业化规模生产。保持蛋白质的天然特性。抑菌作用。同时分离多种血浆成分，适于血浆综合利用。乙醇作为主要原材料，价格低廉，易于获得。第64页，共91页，星期日，2025年，2月5日白蛋白在肝脏内产生。每个肝细胞每秒钟能合成约7000个白蛋白分子，正常人每天可合成白蛋白15g，而在失血的情况下，合成速率可提高2-3倍。故在肝功能正常，营养充足的情况下，白蛋白损失后补充很快，一般丧失400ml血浆，1-2天即可恢复。2、白蛋白制剂的种类目前白蛋白类制剂主要有两种：人血白蛋白和血浆蛋白成分，两者的区别主要在于含白蛋白的纯度不同，前者为96%以上，后者为83%以上。第23页，共91页，星期日，2025年，2月5日（1）人血白蛋白人血白蛋白是目前国际上使用最多的血液制品，是经低温乙醇法或经批准的其他分离方法，从健康人静脉血浆中提纯，并经60℃10小时加温灭活病毒后制成。有液体和冻干两种剂型。（2）血浆蛋白成分是经低温乙醇或其它适当的方法提取的血浆蛋白制剂，一般蛋白质浓度为4%或5%，其中白蛋白占83%以上。第24页，共91页，星期日，2025年，2月5日2：免疫球蛋白类制品P106，NP127免疫球蛋白构成机体防御感染的体液免疫系统。免疫球蛋白种类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。第25页，共91页，星期日，2025年，2月5日正常人免疫球蛋白（肌注免疫球蛋白）静脉注射免疫球蛋白特异性球蛋白（1）正常人免疫球蛋白又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白(简称丙球)，仅供肌肉注射用，所以又称肌注免疫球蛋白制剂。是采用低温乙醇法从大量混合血浆（药典要求1000人份以上）中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。有液体剂型和冻干剂型两种。1、免疫球蛋白制剂的种类第26页，共91页，星期日，2025年，2月5日主要作用：主要用来预防一些病毒性感染，如甲肝、丙肝、麻疹等疾病的预防以及丙种球蛋白缺乏症的治疗。但是国内滥用正常免疫球蛋白的现象比较严重。一些人认为经常使用