仪器分析分子发光分析法.pptVIP

荧光池I0IIf荧光强度检测器四、荧光强度与荧光物质浓度的关系强度为I0的入射光，照射到浓度很稀的荧光物质时,产生荧光，荧光强度If与入射光强度有下面的关系：If=?fIa=?f（I0-I）Ia为吸收的辐射强度I0为入射光强度I为透射光If=?f（I0-I010-A）=?fI0（1-10-A）I=I010-A第31页，共61页，星期日，2025年，2月5日当A﹤0.05时，方括号中其它各项与第一项相比可忽略不计，上式简化If=2.3?fI0A=2.3?fI0?bc将上式展开第32页，共61页，星期日，2025年，2月5日当A﹤0.05时，If与?f、I0、?和c有关。对一给定物质，当激发光波长和强度一定时，?f、I0、?和b为常数，合并为KIf=KCIp=KC定量分析依据第33页，共61页，星期日，2025年，2月5日荧光强度与物质浓度呈线形关系，If=KC只有在浓度低时使用，荧光物质测定的是微量或痕量组分，灵敏度高浓度高时，If与C不呈线形关系，有时C增大，If反而降低。因为公式[]中后面影响；有时发生荧光猝灭效应第34页，共61页，星期日，2025年，2月5日荧光猝灭——荧光物质与溶剂或其它物质之间发生化学反应，或发生碰撞后使荧光强度下降(荧光效率?f下降)称为荧光猝灭。使荧光强度降低的物质称为荧光猝灭剂第35页，共61页，星期日，2025年，2月5日氧分子及产生重原子效应的溴化物、碘化物等都是常见的荧光猝灭剂碰撞猝灭——M+?激→M*M*+Q→M+Q+热自熄灭——荧光物质发射的荧光被荧光物质的基态分子所吸收，即自吸收现象第36页，共61页，星期日，2025年，2月5日（一）荧光分析仪器——主要由光源、单色器、样品池、检测器和显示器组成。五、荧光和磷光分析仪器第37页，共61页，星期日，2025年，2月5日光源第一单色器液池检测器第二单色器检测器放大器及记录器ex?em与分光光度计有两点不同①两个单色器②检测器与激发光互成直角I0I第38页，共61页，星期日，2025年，2月5日1、光源激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽荧光计中，常使用卤钨灯作光源荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯应用最广泛的一种光源，可发射250~800nm很强的连续光源利用汞蒸气放电发光的光源；常用其发射365nm、405nm、436nm三条谱线以365nm的谱线最强第39页，共61页，星期日，2025年，2月5日2、单色器荧光计用滤光片作单色器，荧光计只能用于定量分析，不能获得光谱大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长?ex第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长?em。第40页，共61页，星期日，2025年，2月5日3、样品池盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边4、检测器把光信号转化成电信号,放大,直接转成荧光强度荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管荧光分析比吸收光度法具有高得多的灵敏度，是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度可大大提高荧光强度5、读出装置扫描激发光谱和发射光谱记录,结果打印输出第41页，共61页，星期日，2025年，2月5日（二）激发光谱和荧光、磷光光谱激发光谱：荧光和磷光均为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定I?ex固定?em荧光波长获得方法：固定?em不变，改变?ex，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，?ex为横坐标得左图，即荧光物质的激发光谱，确定最大?ex第42页，共61页，星期日，2025年，2月5日I?em固定?ex激发光波长获得方法：固定?ex不变，改变?em，以I为纵坐标，?em为横坐标得左图，即荧光物质的发射光谱从曲线上找出最大的?em发射光谱：荧光、磷光光谱第43页，共61页，星期日，2025年，2月5日关于仪器分析分子发光分析法第1页，共6