免疫比浊法检测免疫球蛋白.pptVIP

关于免疫比浊法检测免疫球蛋白第1页，共23页，星期日，2025年，2月5日实验原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。第2页，共23页，星期日，2025年，2月5日免疫比浊法分类当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱透射比浊法:在光源的光路方向（00）测量透射光强度和被检测溶液微粒浓度关系的方法。散射比浊法:在光源的光路方向（50-960）角的方向上测量透射光强度和被检测溶液中微粒浓度关系的方法。第3页，共23页，星期日，2025年，2月5日透射比浊法和散射比浊法光路检测器A检测器BICI0IθIθ透射比浊法散射比浊法第4页，共23页，星期日，2025年，2月5日（一）基本原理是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合物，使反应介质的浊度发生改变。测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。待测物中Ig含量可通过标准曲线计算得出。待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射光呈反比。反应在PEG的作用下，加速复合物的形成。免疫透射比浊法第5页，共23页，星期日，2025年，2月5日透射比浊法测定原理光源诱导剂第6页，共23页，星期日，2025年，2月5日样品光电计滤光片光源透射比浊法测定原理第7页，共23页，星期日，2025年，2月5日透射比浊法的缺陷：(1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通过。(2)溶液中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果数量太小，溶液浊度变化太小，对光通量影响不大。(3)透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能测定抗原－抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原－抗体温育反应时间，检测时间较长。

光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量第8页，共23页，星期日，2025年，2月5日原理散射比浊法在入射光的一定角度检测粒子发出的散射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。第9页，共23页，星期日，2025年，2月5日散射比浊法测定原理增加散透率:660nm测定散射光聚集形成 诱导剂第10页，共23页，星期日，2025年，2月5日散射光测定检测器(LED)光电计样品100%0%时间散射光强度第11页，共23页，星期日，2025年，2月5日速率散射比浊法（一）基本原理—是测定抗原抗体结合反应的动态过程。—所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态的速率比浊分析。—当仪器测定到某一时间内形成速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表所测抗原的量。第12页，共23页，星期日，2025年，2月5日CONCENTRATIONRATE在速率峰基础上完成的标准曲线第13页，共23页，星期日，2025年，2月5日方法评价：敏感度高快速(不必达平衡）抗原抗体结合的动态测定，理论上测定不受本底散射信号的影响可检测微量样品第14页，共23页，星期日，2025年，2月5日原理2.终点散射比浊法让抗原抗体作用一定时间，使其反应达到平衡后，测定其IC形成的量。IC的浊度不再受时间的影响，但反应IC聚合产生絮状沉淀之前，进行浊度测定。第15页，共23页，星期日，2025年，2月5日散射比浊法的缺陷(1)因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个待测样本的吸收和散射效果，可测定结果不准确(2)测定的仍是抗原－抗体反应的第二阶段，不适合快速检测。(3)终点法存在反应本底，测定样本的含量越低本底比例越大，故在微量测定时，本底的干扰是影响准确测定的重要因素。第16页，共23页，星期日，2025年，2月5日影响免疫比浊测定的因素1、抗原抗体比例2、抗体的质量抗体的特异性、效价、亲和力3、反应的溶液4、增浊剂的使用第17页，共23页，星期日，2025年，2月5日1、透