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微生物实验室菌株的保存、复苏与销毁方法汇总
1、平板4℃保存法
此法只适合短期保存,可用于每周转种的质控菌株的保存。方法是将要用的菌株转种于相应的平板上,在平板背面标上转种日期与相应菌名,放入2-8°C冰箱内保存。保存周期不超过1个月。
2、磁珠快速冷冻法
可用于苛氧菌株(如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等)的保存。方法是刮取纯培养的菌苔,洗脱放入含磁珠的菌种保存管中,盖上盖子,在保存管上记录菌株唯一编号、菌名等信息,立即放入-80°C低温冰箱中冻存。该方法也可用于一般细菌的保存。此法可保持细菌1~3年的活性和生物学特性不变。
3、甘油肉汤快速冷冻法
??适用于一般细菌。方法是将对数生长期的细菌(分纯培养18~24b)刮取放入含10%~15%的试剂级的甘油高营养肉汤中,在保存管记录菌株唯一编号、菌名等信息,放在-80°C低温冰箱,使菌悬液迅速冻结。此法可保持细菌1~3年的活性和生物学特性不变。
4、干燥冷冻法
?适用于一般细菌。方法是用厚的无菌滤纸片(至少2片)从平皿上刮取分纯的细菌苔放入灭菌Eppendorf管中,在保存管上记录菌株唯一编号、菌名等信息,先置-20°冰冻保存,待菌种保存盒满后,再移入-80C冰箱保存。此法可保持细菌1~3年的活性和生物学特性不变。
菌株复苏与使用
1、干燥冷冻法保存的菌株
?用无菌镊子取出无菌滤纸片1片,放入无菌肉汤管。取含有细菌的肉汤在培养基上接种划线。菌种取完后立即放回原保存位置。
2、甘油肉汤快速冷冻法保存的菌株
用接种环挑取一环后直接划线接种,无须解冻。菌株取完后立即放回原保存位置。
3、采用磁珠快速冷冻法保存的菌株
由-80°C冰箱取出,于室温中完全解冻融化后,用10ul规格的一次性接种环挑取一颗磁珠,小心地接种于相应平板上,磁珠留存于平板。
4、新购置菌株
?购买的标准菌株初次复苏使用时,应批量保存在菌种管中,于-80°C冰箱保存。
?新的标准菌株复苏后,传代最多不超过3次,如超过3次将不再作为标准菌株使用。
菌株的销毁
应放置灭菌指示标志,以确认灭菌效果,必要时进行灭菌效果验证,如炭疽杆菌肉毒梭状芽孢杆菌和破伤风梭状芽孢杆菌等有较强抵抗力和强致病性的芽孢菌株,应对其进行高压蒸汽灭菌。杀死全部芽孢的方法是将第1次高压灭菌处理物品放35°C孵箱培养,使芽孢繁育成繁殖体,再进行第2次高压灭菌处理。
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