放射免疫检测技术.pptVIP

关于放射免疫检测技术第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日基本内容一、放射免疫检测技术的基本原理二、放射免疫分析（RIA）三、免疫放射分析（IRMA）四、RIA与IRMA的比较五、放射免疫分析中造成测量误差的因素六、核废物的处理七、应用八、课堂小结九、作业第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日一、放射免疫检测技术的基本原理1、7个基本概念2、常用的放射性核素3、放射性核素的选择原则4、放射性标记的抗原或抗体的要求5、制备放射性核素标记物6、放射性标记物的纯化7、理想的分离技术8、免疫复合物分离常用方法9、核射线探测仪器的探测原理第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、7个基本概念⑴放射性核素：是指原子核能自发地产生成分或能级的变化，在变化时伴有射线的发射（放射性），然后变成另一种元素的核素。一、放射免疫检测技术的基本原理放射量单位有:①放射性活度②放射性比活度③放射性浓度第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、7个基本概念⑵放射性活度：一定量的放射性核素在单位时间内的核衰变数，即每秒核衰变次数。单位：贝可勒尔(Becquerel，Bq)1Ci=3.7×1010Bq一、放射免疫检测技术的基本原理第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、7个基本概念⑶放射性比活度：是指固体样品的放射性活度，即单位质量样品中所含放射性活度，以Bq/g或Bq/mmol表示。⑷放射性浓度：是指液体样品的放射性活度，即单位体积溶液中所含放射性活度，以Bq/ml表示。一、放射免疫检测技术的基本原理第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、7个基本概念⑸比活度：是单位质量标记物的放射强度，单位为Bq/?g。标记抗原的比放射性越高，所需标记抗原量越少，实验系统的敏感度越高。但过高的比放射性可能会损伤抗原的免疫活性。如碘标记化合物以单碘标记为宜。一、放射免疫检测技术的基本原理第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、7个基本概念⑹放射化学纯度：是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率。影响因素:①被标记物不纯，杂质也被放射性核素标记；②标记后的分离纯化不完全；③标记化合物贮存过程中的碘脱落。一、放射免疫检测技术的基本原理第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、7个基本概念⑺免疫活性：指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率。以检查标记后免疫活性损失情况。一、放射免疫检测技术的基本原理第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日2、常用的放射性核素：放射性核素依据衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。β型：3H（最常用）、14C和32P。γ型：125I（最常用）、131I、51Cr和60Co。一、放射免疫检测技术的基本原理第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日125I和3H标记物特点比较125I标记物3H标记物标记方法方法简便，易获得高比放射性标记物方法较难，不易获得高比放射性标记物对标记化合物影响标记时以I代替H1改变物质结构，可影响抗原免疫学活性不改变抗原结构，一般不影响抗原免疫活性测量方法方法简便、效率高方法复杂，效率低测量仪器γ计数器液体闪烁计数器半衰期60.2天约11年废弃物处理容易较难第11页，共36页，星期日，2025年，2月5日3、放射性核素选择原则高比活度、适宜半衰期、对抗原或抗体没损害、容易标记。4、放射性标记的抗原或抗体的要求纯度高、灵敏、有足够或完整的免疫活性、高亲和常数、特异性强、交叉反应率低。一、放射免疫检测技术的基本原理第12页，共36页，星期日，2025年，2月5日5、制备放射性核素标记物⑴直接标记法将125I直接结合在蛋白质侧链的酪氨酸残基苯环上，形成单碘酪氨酸或双碘酪氨酸。操作简便，结合效率高，但只能标记含酪氨酸的化合物，有时可能会损害蛋白质的活性。⑵间接标记法先将放射性碘连接到一个小分子载体上，再将这个小分子载体与蛋白质结合。一、放射免疫检测技术的基本原理第13页，共36页，星期日，2025年，2月5日6、放射性标记物的纯化