高中生物常用的菌种的筛选方法.pdfVIP

高中生物常用的菌种的筛选方法

m施加选择性压力分开法

主要是利用不同种类的微生物其生长殖对环境和营养

的要求不同，如温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源等，

人为控制这些条件，使之利于某类或某种微生物生长，而不

利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势。而

得以快速分开纯化的目的。如可以控制培养时的氧，可将好

氧微生物和厌氧微生物分开；通过控制温度，可将嗜热微生

物和非嗜热微生物分开；控制pH,可将嗜酸、嗜碱微生物分

开等。在分开培养基中也可以加入不同的抗生素或试剂来增

加选择性。如在分开放线菌和细菌时，可加入抗真菌抗生素;

分开真菌时，可加入抗细菌药物。

(2)随机分开方法

有些微生物的产物对筛选没有直接的选择性指示作用，因

此常采纳随机分开方法分开。

A、抗生素产生菌的分开抗生素产生菌的分开常用抑菌圈

法。实验必必需用工具菌：采纳抗生素的敏感菌，传统上常

用金黄色葡萄球菌和枯草杆菌。

B、抗肿瘤药物产生菌的分开抗肿瘤药物产生菌的分开常

用方法：生化诱导法、SOS生色检测法、DNA修复能力突变

株。原理是利用DNA的损伤，微生物发生突变。BL生化诱

导法：将大肠杆菌的lacZ基因连接在人噬菌体的PL启动子

下，当DNA损伤时，诱发人阻遏物CI分解，PL启动子启动

lacZ基因转录，测定表达的？-半乳糖昔酶活性，来检测药

物的存在。B2、SOS生色检测法：利用当DNA损伤时，可活

化yecA蛋白，进而分解噬菌体的阻遏蛋白，再引起sifA基

因启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖甘酶活性，来

检测药物的存在。

C、生长因子产生菌的分开以氨基酸产生菌为例，介绍筛

选方法。首先将待试菌接入加了抗真菌的化合物(如亚胺环

己酮)的分开培养基中生长，然后采纳影印法，将菌落复印

到能支持氨基酸产生菌生长的培养基中，培养2-3天后，用

紫外线杀司长好的菌落，再往此平板上面铺一层相应营养缺

陷型菌株菌悬液，培养16小时后，被杀死的氨基酸产生菌

的菌四周应有一检测菌的生长圈。

(3)目的微生物分开

A、依据形态筛选突变株

B、依据平板菌生化反应筛选变株透明圈法、呈色

圈法、抑菌圈法、浑浊圈法等。

①透明圈法：在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使

培养基混浊。能分解底物的微生物便会在菌四周产生透明

圈，圈的大小初步反应该菌株利用底物的能力。该法在分开

水解酶产生菌时采纳较多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核

酸酶产生菌都会在含有底物的选择性培养基平板上形成肉

眼可见的透明圈。在分开某种产生有机酸的菌株时，也通常

采纳透明圈法进行初筛。在选择性培养基中加入碳酸钙，使

平板成混状，将样品悬浮液涂抹到平板上进行培养，由于产

生菌能够把菌四周的碳酸钙水解，形成清楚的透明圈，可

以轻易地鉴别出来。分开乳酸产生菌时，由于乳酸是一种较

强的有机酸，因此，在培养基中加入的碳酸钙不仅有鉴别作

用，还有酸中和作用。

②变色圈法：关于一些不易产生透明圈产物的产生

菌，可在底物平板中加入指示剂或显色剂，使所必需微生物

能被快速鉴别出来。如筛选果胶酶产生菌时，用含0.2%果胶

为惟一碳源的培养基平板，对含微生物样品进行分开，仔菌

长成后，加入0.2%刚果红溶液染色4h,具有分解果胶能

力的菌四周便会出现绛红色水解圈。在分开谷氨酸产生菌

时，可在培养基中加入溪百里酚蓝，它是一种酸碱指示剂，

变色范围在PH6.2〜7.6,当pH在6.2以下时为黄色，pH7.6

以上为蓝色。假设平板上出现产酸菌，其菌四周会变成黄

色，可以从这些产酸菌中筛选谷氨酸产生菌。③生长圈法：

生长圈法通常用于分开筛选氨基酸、核甘酸和维生素的产生

菌。工具菌是一些相对应的营养缺陷型菌株。将待检菌涂布

于含高浓度的工具菌并缺少所必需营养物的平板上进行培

养，假设某菌株能合成平板所必需的营养物，在该菌株的菌

四会一个