第五章分子生物学.ppt

（四）其他调控元件1.增强子增强子是能够远距离作用调节启动子来增强转录效率的DNA序列。增强子和启动子的差异2.沉默子沉默子是能够抑制附近基因表达的DNA序列。沉默子对基因转录调控的作用特点与增强子类似，距离和方向都无关紧要，因此也称为负增强子。3.绝缘子绝缘子是一段能阻断增强子使转录失活或防止沉默子使异染色质延伸保护转录进行的DNA元件。（五）转录过程（a－1）TBP与TFIIB,TFIIF和RNA聚合酶II在起始子处形成最小起始复合物。（五）转录过程（a－2）添加TFIIH,TFIIE和ATP使得DNA在起始区解链，RNA聚合酶的最大亚基的CTD部分磷酸化。（五）转录过程(b)ATP供能下,TFIIH的解旋酶活性引起DNA进一步解旋，转录泡增大。RNA聚合酶II离开启动子。（五）转录过程(c)TEFb对CTD进一步磷酸化，RNA连续合成。延伸时不需要TFIIE和TFIIH。第三节RNA的加工一、概述（一）概念RNA加工就是前体RNA（pre-RNA）转变为成熟RNA分子的过程。（二）方式（1）核苷酸的切除（2）添加核苷酸（3）碱基或糖苷的修饰二、rRNA的加工（一）原核生物rRNA的加工①转录产物内部碱基配对折叠形成茎环结构；②一些特定的蛋白能够识别这些茎环结构与之结合，形成RNP；（一）原核生物rRNA的加工特定核苷酸甲基化；RNAaseⅢ剪切释放出5S、16S、23S前体分子RNAaseM5、M16、M23分别在其不同前体分子末端进一步剪切，最终释放成熟的5S、16S、23SrRNA分子。（一）真核生物rRNA的加工47S前体rRNA首先切除外部转录间隔区(ETS),再切除内部转录间隔区(ITS1)，释放出32S和20S两个前体rRNA分子；（二）真核生物rRNA的加工接下来32S和20S前体rRNA进一步修剪，20S前体rRNA加工成18S成熟的rRNA，而32S前体rRNA加工成5.8S和28SrRNA；（一）原核生物tRNA的加工三、tRNA的加工①前体tRNA转录产物首先折叠成茎环结构；②内切核酸酶RNAaseE、F在前体3端切除一个侧翼序列，留下额外9nt；第五章转录本章重点1.RNA聚合酶的结构及功能。2.原核生物启动子、终止子的结构及功能。3.增强子、沉默子和绝缘子的概念。4.RNA的加工5.核酶的概念。6.反转录的概念。本章内容第一节原核生物的转录第二节真核生物的转录第三节RNA的加工第四节反转录一、基本概念转录：转录是由RNA聚合酶催化，通过碱基互补配对合成RNA的反应。RNA合成的方向是即从RNA分子的5’→3’。分3步：起始、延伸、终止第一节原核生物的转录一、基本概念模板链：转录的模板，也称为非编码链或反义链。非模板链：除U变成T外，与RNA相一致，也称为编码链或有义链。二、RNA聚合酶（一）功能该酶在RNA合成过程中指导NTP同模板DNA碱基配对，并催化磷酸二酯键的形成。原核细胞只有一种RNA聚合酶，负责所有RNA分子（包括mRNA、rRNA、tRNA）的合成。该酶活性能被抗生素利福平抑制。（二）结构核心酶由α2ββ’ω五个亚基构成，催化磷酸二酯键的形成。亚基功能α酶组装、识别启动子、结合激活子ββ’催化中心ω酶的组装和稳定σ识别启动子σ因子σ因子只参与转录的起始，当RNA合成开始一段时间后，立即从核心酶上释放。不同原核生物都具有基本相同的核心酶，但σ亚基差异较大，这决定了原核生物基因表达的选择性。三、转录过程（一）起始过程形成闭合启动子复合物形成开放启动子复合物合成最初的几个核苷酸启动子清除启动子转录起始时，RNA聚合酶结合到位于基因起始上游处特殊序列的双链DNA上，该特殊序列称为启动子。核心启动子启动子上转录起始必需的DNA序列。核心启动子功能序列别名-35位点识别区TTGACASextamaBox-10位点解链区TATAATPribnowBox+1位点起始点Ｇ/Ａ启动效率启动子的启动效率决定于：核心启动子的碱基序列－35区与－10区之间的距离（二）延伸σ因子脱落RNA连续合成边解旋边复性延伸速度不均（三）终止RNA聚合酶沿着模板DNA移动合成RNA分子，直到遇到终止子，聚合酶停止把底物加到生长的RNA链3’-OH端，释放出完成的RNA分子，聚合酶从DNA模板解离。终止子1.概念终止子是指引起RNA聚合酶转录终止的一段DNA序列。2.类型不