婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法HPLC法.docVIP

婴幼儿奶粉中双氰胺检测方法（HPLC-UV法）

北京时间1月25日凌晨消息,新西兰牛奶中发觉了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。即使国际标准未对食品中双氰胺限量,但高剂量双氰胺对人体是有毒。

针对婴幼儿奶粉中基质复杂特点,本方法加大了净化材料用量,以取得了愈加好净化效果。采取天津博纳艾杰尔科技新一代Cleanert?MAS-QuChERS-双氰胺净化管（500mg/15mL,货号:MS-SQA02）和Venusil?HILIC液相色谱柱,建立了奶粉中双氰胺MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。

1试验部分

1.1仪器、试剂与材料

高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。

双氰胺标准品（CAS:461-58-5;FW=84.08）,新一代Cleanert?MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil?HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,试验用水为超纯水。

表1双氰胺信息

名称

结构式

分子量

CAS

双氰胺

84.08

461-58-5

1.2试验步骤

称取1g试样于50mL具塞离心管中,加2mL水,涡旋30s,加2ml乙腈涡旋30s。再往现有提取液中加2mL乙腈,反复上述提取步骤。再将该提取步骤反复2次,得到累计约10mL提取液。以4000r/min离心5min,将全部上清液加入新一代Cleanert?MAS-QuChERS管中（500mg/15mL）,将MAS管上下晃动30s,然后涡旋30s后,8000r/min离心5min,取全部上清液（约10ml）于玻璃试管中,50℃下氮气吹干,加入1ml乙腈复溶,过0.22μm微孔滤膜,待测。

注:1.做基质加标试验时标准溶液提议选择以水为溶剂,预防加标瞬间发生蛋白沉淀;

2.乙腈提取分4次,为预防乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快,影响提取效果。

1.3试验条件

1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）:

色谱柱:Venusil?HILIC（5μm,100?,4.6*250mm）;

流动相:10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）:乙腈=15:85;

波长:220nm;进样量:10μl;柱温:30℃;流速:0.8mL/min。

结果与讨论

2.1高效液相色谱法:

2.1.1

图1双氰胺1μg/ml标准溶液液相色谱图

2.1.2实际样品基质加标

正确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;

分别称取1g奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为0.5μg/g,1μg/g,2μg/g,5.0μg/mL和10μg/g添加样品,根据上述提取、净化方法操作,所得净化液根据上述色谱条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表4:

表4双氰胺线性方程和定量限（HPLC法）

名称

保留时间

线性方程

相关系数

最低定量限（S/N=10）

双氰胺

5.57min

Y=108.16X+27.827

0.9971

0.5μg/g

2.1.

选择市售某品牌婴幼儿奶粉试样,进行添加回收试验,结果见表5

表50.5μg/g添加回收试验结果（HPLC法）

平行1

平行2

平行3

平均值

RSD

82.3%

85.5%

89.1%

85.63%

3.97%

图2婴幼儿奶粉空白液相色谱图图3婴幼儿奶粉0.5μg/g添加双氰胺液相色谱图

产品订货信息

产品名称

规格型号

货号

新一代

MAS-QuChERS-双氰胺净化管（填料量加大,更适合婴幼儿奶粉等复杂样品）

500mg/15mL,50支/包

MS-SQA02

MAS-QuChERS-双氰胺净化管

100mg/2mL,50支/包

MS-SQA01

VenusilHILIC液相色谱柱

4.6*250mm,5μm,100?

VH952505-0

2.1*150mm,5μm,100?

VH951502-0

微孔滤膜

0.22μm,直径13mm,200/Pk

AM021320

双氰胺对照品

500mg/瓶,含量≥99.0%

DCD-0001

1g/瓶,含量≥99.0%

DCD-0002

离心管

50mL,带螺纹盖,25个/包

LXG0050

一次性注射器

5mL,100/pk

?ZSQ-5ML

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