膨化宠粮中芽孢类益生菌的检测方法征求意见稿.pdf

ICS07.100

CCSC50

T/CASME

中国中小商业企业协会团体标准

T/CASMEXXX—2023

膨化宠粮中芽孢类益生菌的检测方法

(征求意见稿)

2023-XX-XX发布2023-XX-XX实施

中国中小商业企业协会发布

T/CASMEXX—2023

膨化宠粮中芽孢类益生菌的检测方法

1范围

本文件规定了膨化宠粮中芽孢类益生菌检测方法的术语和定义、检测方法、计数方法、结果计算、

人员防护、检测过程中防止污染的措施等。

本文件适用于益生菌膨化宠粮中枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的检测与计数，文件起草成员均可自

愿采用。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法的要求

GB/T25916.1洁净室及相关受控环境生物污染控制第1部分：一般原理和方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

地衣芽孢杆菌

属于芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，菌体杆状，革兰氏阳性，有芽孢，中生。可抵抗不良环境条件，在

饲料工业被制成微生物添加剂使用。

3.2

枯草芽孢杆菌

革兰氏阳性杆菌，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，内生孢子，接触霉阳性，发酵葡萄糖产酸，水解淀粉，

不水解马尿酸盐，可还原硝酸盐，水解酪素，在55℃可生长的一群芽孢菌。

3.3

益生菌膨化宠粮

指添加了益生菌制剂的膨化型宠物粮食。

3.4

CFU（菌落形成单位）

在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。

4检测方法

4.1设备和材料

本检测方法主要使用如下设备和材料：

a)恒温培养箱：37℃±1℃；

b)冰箱：2℃～5℃；

c)恒温水浴箱：50℃±1℃；

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T/CASMEXX—2023

d)天平：感量为0.1g；

e)振荡器；

f)摇床：37℃±1℃，250r/m；

g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

h)无菌锥形瓶：容量250mL、500mL；

i)无菌培养皿：直径90mm；

j)显微镜：1000倍；

k)pH计或pH比色管或精密pH试纸。

4.2培养基和试剂

在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，实验室用水采用蒸馏水或去离子水，符合GB/T6682的要求。

培养基和试剂如下：

a)营养琼脂培养基，见附录A1；

b)营养肉汤培养基，见附录A2；

c)无菌生理盐水，见附录A3。

4.3操作步骤

4.3.1制备

称取10g样品，置于装有89mL无菌生理盐水的250mL锥形瓶中，瓶中装有10～20粒玻璃珠（直径

2mm～3mm），并加入1g吐温80。用无菌透气膜扎口后，置于50℃水浴20min，然后在37℃下250r/min

振荡1h，制成1:10稀释的样品均液。

4.3.2稀释

4.3.2.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL无菌生理盐

水的无菌试管中，振荡器均质样品或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合，制成1:100稀释的样品均液。

4.3.2.2取1mL无菌吸管或微量移液器吸头吸取1:100样品匀液1mL，按上述步骤，做10倍递增样品

匀液，