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ICS67.060

B21

DB62

甘肃省地方标准

DB62/T2986—2019

春小麦花药培养技术规程

2019-04-01实施2019-03-07发布

2019-04-01实施

甘肃省市场监督管理局发布

DB62/T2986—2019

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂 1

5仪器设备 2

6培养基成分、配制及灭菌 2

7春小麦花药培养技术流程 2

I

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II

DB62/T2986—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由甘肃省农业科学院提出。

本标准由甘肃省粮食作物栽培标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：甘肃省农业科学院生物技术研究所。

本标准主要起草人：王炜、罗俊杰、叶春雷、陈琛、杨随庄、欧巧明、裴怀弟、李忠旺、李淑洁。

DB62/T2986—2019

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春小麦花药培养技术规程

1范围

2

2规范性引用文件

3术语和定义

下列术语和定适用于本文件。

3.1

花药培养

而改变正常花药革在粉粒的发育途径，使其连续进行有丝分裂形成细胞团，进而形成一团无分化的薄壁

3.2

单倍体

3.3

愈伤组织

3.4

愈伤组织诱导率

植物组织培养中用来衡量愈伤组织诱导效率的指标。

3.5绿苗生产率

植物组织培养中用来衡量愈伤组织诱导与分化两个过程中获得绿苗效率的指标。

4试剂

4.1超纯水

应符合GB/T6682-2008中规定的三级超纯水。

1

2

DB62/T2986—2019

4.2试剂

消毒试剂：乙醇(75%)。

无机试剂：硝酸铵、硝酸钾、二水氯化钙、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硼酸、四水硫酸锰、七水硫酸锌、钼酸钠、五水硫酸铜、氯化钴、硫酸亚铁、EDTA二钠盐。

有机试剂：肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、生物素、谷氨酰胺。

生长调节剂：2,4-D、6-BA、IAA、激动素。

其他试剂：秋水仙素、琼脂、蔗糖。

所有试剂等级均为分析纯。

5仪器设备

电子分析天平(精确度：0.0001g)、纯水仪、pH计、恒温培养箱(温度范围：5℃~65℃)、超净工作台、高压灭菌锅、电炉(220V)或电磁炉。

量筒(10mL～1000mL)、烧杯(50mL～2000mL)、容量瓶(50mL～1000mL)、pH试纸、移液管。

6培养基成分、配制及灭菌

6.1愈伤组织诱导培养基成分

每升培养基中含有2000mg硝酸钾、380mg磷酸二氢铵、200mg七水硫酸镁、700mg硫酸钾、140mg二水氯化钙、6.06mg四水硫酸锰、3mg四水硫酸锌、3.0mg硼酸、0.05mg碘化钾、0.025mg五水硫酸铜、0.025mg六水氯化钴、0.05mg二水钼酸钠、800mg谷氨酰胺、0.5mg盐酸吡哆醇、0.5mg盐酸硫胺素、1.5mg生物素、2mg甘氨酸、5500mg琼脂、90000mg蔗糖、27.8mg硫酸亚铁、37.8mgEDTA二钠盐、2mg2,4-D、0.5mg激动素。

6.2愈伤组织分化培养基成分

每升培养基中含1650mg硝酸铵、1900mg硝酸钾、440mg氯化钙、370mg七水硫酸镁、170mg磷酸二氢钾、0.83mg碘化钾、6.2mg硼酸、22.3mg四水硫酸锰、8.6mg七水硫酸锌、0.25mg钼酸钠、0.025mg硫酸铜、0.025mg氯化钴、27.8mg硫酸亚铁、37.8mgEDTA二钠盐、100mg肌醇、0.5mg烟酸、0.5mg盐酸吡哆醇、0.1mg盐酸硫胺素、2.0mg甘氨酸、5500mg琼脂粉、30000mg蔗糖、2.0mg激动素、0.15mgIAA。

6.3配制

按照上述培养基成分含量溶解于超纯水后混合，配制后将pH值调节至5.8～6.2。

6.4灭菌

将上述配制好的培养基置于高压灭菌锅中120℃、1.06kg/cm2条件下灭菌20min。

7春小麦花药培养技术流程

7.1采穗

DB62/T2986—2019

选择生长健壮、无病虫害、处于孕穗期的植株，在上午9h～11h时取花药中大部分小孢子细胞处于单核靠边期的麦穗，装于塑料袋中在冰箱中4℃预处理24h～48h。

7.2消毒

接种前在超净工作台上用75%的酒精对麦穗进行表面消毒约30s～60s。

7.3接种