生长量测定法微生物基础17课件.pptx

生长量测定法微生物基础

研究人员想到了用群体的变化量来间接反应群体的生长繁殖情况。

血球计数板法平板菌落计数法染色计数法液体稀释法测定微生物细胞数量的方法

体积测量法称干重法比浊法测定微生物菌体生长量的方法

微生物群体在生长过程中伴随着一系列生理指标发生变化酸碱度发酵液含氮量、含糖量、产气量测定含氮量、含糖量、还原糖、氨基氮、ATP、DNA、RNA等，与生长量平行的生理指标，反应微生物的生长情况。

一、测定微生物细胞数量的方法

（一）血球计数板法直接计数法总菌数计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，但对杂菌和杂质不易分辩。

（一）血球计数板法优点简便直观快捷缺点只适合个体较大的微生物，如酵母菌、霉菌的孢子，测定的结果是微生物个体的综合，不能区别死活菌。

（二）染色计数法利用染色剂，使死活细胞呈现不同颜色，计数活细胞即可

（二）染色计数法查看酵母菌的活菌数用美兰染色液对菌体进行染色后，活细胞无色，死细胞蓝色，在显微镜下进行活菌计数就可以了。

优点方便实用价格低廉操作简单缺点时间不宜过长，否则部分活细胞也会着色，会干扰计数。（二）染色计数法

（三）平板菌落计数法最常用的活菌计数法在高度稀释条件下每一个活的单细胞均能繁殖成一个菌落，因而可以用培养的方法使每个活细胞生长成一个单独的菌落，并通过长出的菌落数去推算菌悬液中的活菌数，因此菌落数就是待测样品所含的活菌数。

（三）平板菌落计数法涂布法倾注法

（三）平板菌落计数法1.涂布平板法

（三）平板菌落计数法2.倾注法混菌法混匀法

二、测定微生物菌体生长量的方法

体积测量法菌丝长度测量法称干重法比浊法

（一）称干重法以干重直接衡量微生物群体的生物量；称干重法往往利用离心或过滤法测定。

（二）过滤法丝状真菌用滤纸过滤，细菌用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥，干燥后称重。

（三）体积测量法测菌丝浓度法把待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或离心，然后观察其体积取一定量的待测培养液(如10mL)放在有刻度的离心中，设定一定的离心时间(如5min)和转速(如5000r/min),离心后，倒出菌液，测出上清液体积V，则菌丝浓度为(10-V)/10。

（四）比浊法主要用于发酵工业菌体生长监测取一根据培养液中菌体细胞数与浑浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用分光光度计测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量。

（四）比浊法主要用于发酵工业菌体生长监测为了对某一培养物类的菌体生长做定时跟踪，可采用不必取样的侧壁三角烧瓶来进行。测定时，只要把瓶内的培养液倒入侧壁管中，然后将此管插入特制的光电比色计比色座孔中即可随时测出生长情况。